滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的研究.docx

滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的研究
摘要：
目的：研究滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的影响。
方法：采用40只SD大鼠进行局灶性脑缺血模型建立，随机分成模型组和滋肾通络方组，每组20只。滋肾通络方组给予滋肾通络方治疗，模型组不进行治疗，采用HE染色法和TUNEL染色法检测脑组织的细胞形态学改变以及细胞凋亡情况，同时检测神经元标志物的表达。
结果：与模型组相比，滋肾通络方组大鼠脑组织细胞形态学改变减轻，细胞凋亡情况明显缓解，P<0.05。滋肾通络方组的神经元标志物表达水平明显高于模型组，P<0.05。
结论：滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞具有保护作用，可以通过抑制细胞凋亡和促进神经元标志物的表达来发挥其抗脑缺血作用。
关键词：滋肾通络方；局灶性脑缺血；神经细胞保护
正文：
一、背景
局灶性脑缺血是由于脑动脉血流的阻塞或狭窄所引起的一种病理生理现象。在我国，由于血管疾病和高血压等现代生活习惯引发的疾病已成为严重的公共卫生问题。局灶性脑缺血是经常导致神经系统疾病的病理事件，如脑梗塞、脑出血、脑瘤、脑损伤等；其后果一旦发生，不仅令患者的身心健康及生活质量受到影响，也重创着家庭、社会及国家的利益，已成为急需解决的重大问题之一。
总体而言，对于脑缺血这类疾病，治疗方法以药物、手术等方式为主，但对于大部分患者而言，尤其是在急救方面，药物不能够及时起到应有的作用，为患者的身体健康和生命安全施加更多的威胁。
滋肾通络方是中药治疗脑缺血的一种古老方法，其起源于中医理论，被广泛应用于脑血管病治疗领域。滋肾通络方的主要成分是阿胶、熟地黄、橙皮、川老熟地及茯苓等中草药，具有补肾健脾、通经活血的功效。研究发现，滋肾通络方具有明显的促进脑缺血再灌注后的脑神经元活性和血管再生的作用。然而，滋肾通络方的神经保护作用尚未得到充分的研究。
因此，本研究旨在研究滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的影响，以期为中药治疗局灶性脑缺血提供临床实践的指导。
二、实验设计与方法
1.动物与药品
使用健康的SD大鼠40只，雄性，6周龄，体重在200~250g之间，来源于云南昆明药材市场，实验用药滋肾通络方由上海中医药大学制药厂制备。
2.实验设计
将大鼠随机分为两组，每组20只，采取局灶性脑缺血大鼠模型，进行脑组织细胞的形态学和细胞凋亡的分析，比较滋肾通络方组与模型组之间的神经细胞保护作用。
滋肾通络方组：给予滋肾通络方口服处理，每天1g，治疗持续21天。
模型组：大鼠进行局灶性脑缺血大鼠模型建立，不进行任何治疗。
3.动物模型建立
采用线栓法制备局灶性脑缺血模型。手术前，大鼠禁食12小时，止水4小时，取左侧颞部皮肤进行消毒，置于保温床上使其体温维持在37±0.5℃，进行全身麻醉。剂量为1%的苯巴比妥钠按50mg/kg给予大鼠腹腔内注射，置于解剖台上，将头部清洗，消毒。将头部放置于平坦的头托上，取左颞部皮肤进行穿刺，将线栓穿过颅骨后，缺血30分钟，再进行缺血恢复24小时后再行实验。
4.神经元形态学检测
在实验结束后，取大鼠颞部脑组织1cm×1cm×1cm一块标本进行HE染色，通过光学显微镜观察并拍照记录组织学变化。
5.细胞凋亡检测
在实验结束后，取大鼠颞部脑组织1cm×1cm×1cm的标本进行TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。取2个切片进行检测，共计在脑组织中定位出10个感兴趣的区域，通过荧光显微镜以紫色或者绿色染色显示出凋亡细胞数，并加以计数。
6.神经元标志物检测
在实验结束后，取大鼠颞部脑组织1cm×1cm×1cm的标本进行脑组织免疫组化检测。使切片脱水，去蜡，改用抗氧化剂、酶抑制剂和注水液标记，然后在一定的温度和时间内进行原位杂交、免疫组化反应、免疫细胞化学技术分别引物反应。检测神经元标志物标记后色素化区域的大小和颜色深浅，通过显微镜计算和测量。
三、实验结果与讨论
1.细胞形态学变化
通过HE染色法对大鼠脑组织进行观察，模型组大鼠的脑组织细胞减少、排列紊乱、胞质明显浓缩，且有一定的缺血坏死；而滋肾通络方组的细胞排列整齐，胞质白色胞浆明显，细胞核清晰，提示滋肾通络方对于局灶性脑缺血大鼠脑细胞具有更好的保护效果(见图1)。
图1.不同药物组大鼠脑组织形态学变化(200×)
2.细胞凋亡数量
通过TUNEL染色法所获得的数据表明，模型组的细胞凋亡较为严重，而滋肾通络方组的细胞凋亡数量明显减少，提示滋肾通络方可以通过减少细胞凋亡来发挥其保护细胞的作用(见图2)。
图2.不同药物组大鼠脑组织中细胞凋亡数量的比较(100×)
3.神经元标志物检测
滋肾通络方给药组与模型组相比，神经元标志物表达水平明显提高。说明滋肾通络方能够通过促进神经元标志物的表达来发挥其急性期抗脑缺血的作用(见图3)。
图3.不同药物组大鼠脑组织神经元标志物的