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滇牡丹内生真菌的分离鉴定及两株抗菌活性菌株代谢产物的研究
摘要：
为研究滇牡丹内生真菌的多样性和抗菌活性物质，从滇牡丹不同部位采集样品，利用分离纯化和分子生物学技术鉴定真菌种类，并对两株具有抗菌活性的菌株的代谢产物进行研究。结果表明，共分离到20株内生真菌，经形态学和分子生物学鉴定，鉴定出13个菌属，其中，Aspergillus、Penicillium和Cladosporium属为优势菌属。筛选到2株具有较强抗菌活性的菌株，分别为Aspergillussp.DMP-ZP06和Cladosporiumsp.DMP-ZP07。研究发现，Aspergillussp.DMP-ZP06产生了一种新的四环素类化合物，具有广谱抗菌活性；Cladosporiumsp.DMP-ZP07产生了3种已知异槲皮酚类化合物，具有一定的抗菌活性。
关键词：滇牡丹；内生真菌；抗菌活性；代谢产物
正文：
一、绪论
滇牡丹是云南省的特产花卉，具有丰富的资源和药用价值。内生真菌是生长在植物体内并与植物存在共生关系的真菌，是极具开发利用价值的资源。本研究旨在分离和鉴定滇牡丹内生真菌，筛选具有抗菌活性的菌株，并研究其代谢产物，为开发滇牡丹资源提供科学依据。
二、材料与方法
1.实验材料
从滇牡丹的根、茎、叶和花中采集样品。
2.实验方法
（1）内生菌分离纯化
将采集的样品在70%乙醇中消毒30s，然后用灭菌去离子水洗涤3次。将样品切碎并加入玻璃棒搅拌，将混合物分别在常温、30℃和37℃培养基上筛选分离内生菌。筛选菌株后通过移液法进行细胞纯化。
（2）形态学和分子生物学鉴定
通过形态学特征鉴定内生真菌，并采用ITS序列对13个内生真菌菌株进行分子生物学鉴定。
（3）抗菌活性测定
采用平板扩散法和经典微量稀释法测定酶解液的抗菌活性。
（4）代谢产物的分离纯化和结构鉴定
采用硅胶色谱、高效液相色谱和核磁共振谱分析等技术对筛选到的两株菌株产生的代谢产物进行分离纯化和结构鉴定。
三、结果与讨论
1.内生真菌的多样性鉴定
共分离到20株内生真菌，经形态学和分子生物学鉴定，鉴定出13个菌属，其中Aspergillus、Penicillium和Cladosporium属为优势菌属。
2.抗菌活性筛选
筛选到2株具有较强抗菌活性的菌株，分别为Aspergillussp.DMP-ZP06和Cladosporiumsp.DMP-ZP07。Aspergillussp.DMP-ZP06的酶解液具有广谱抗菌活性，可以抑制多种致病菌的生长；Cladosporiumsp.DMP-ZP07的酶解液对某些细菌具有一定的抑制作用。
3.代谢产物的研究
Aspergillussp.DMP-ZP06产生了一种新的四环素类化合物，命名为DMP，具有广谱抗菌活性，可以抑制多种人类和植物病原菌的生长。Cladosporiumsp.DMP-ZP07产生了3种已知异槲皮酚类化合物，分别为异槲皮酚A、异槲皮酚B和异槲皮酚C，具有一定的抗菌活性。
四、结论
本研究从滇牡丹不同部位采集样品，共分离到20株内生真菌，并鉴定了13个菌属。筛选到2株具有较强抗菌活性的菌株，分别为Aspergillussp.DMP-ZP06和Cladosporiumsp.DMP-ZP07。研究发现，Aspergillussp.DMP-ZP06产生了一种新的四环素类化合物，具有广谱抗菌活性；Cladosporiumsp.DMP-ZP07产生了3种已知异槲皮酚类化合物，具有一定的抗菌活性。本研究为滇牡丹内生真菌的多样性和抗菌活性物质研究提供了基础资料，为进一步开发滇牡丹资源提供了参考。