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桑黄胞内多糖的分离纯化、活性及理化性质研究
一、引言
桑黄是中国传统的药用材料之一，具有很高的药用价值，已被广泛用于中药配方。近年来，随着对中药的深入研究，桑黄的药理作用得到了更加深入的了解，其中胞内多糖作为桑黄的主要成分之一，其药用价值也日益受到重视。该多糖可以提高免疫功能，抗氧化，降血糖，降血脂等，因此被广泛的研究和应用。但目前对于桑黄胞内多糖的纯化分离及其活性和物理化学性质的研究并不是很充分。本文将对桑黄胞内多糖的分离纯化、活性及理化性质进行探究。
二、材料和方法
2.1材料
原料：桑黄粉末
试剂：乙醇、异丙醇、醚、苯酚、庚酸、硫酸、甘氨酸、硫酸铜、邻苯二甲酸、Bovineserumalbumin(BSA)、二乙酰胶、缬氨酸氨基肽琼脂糖凝胶、SepharoseCL-6B凝胶、Edgebuffer、葡萄糖、HCl、NaOH、NaH2PO4等。
2.2方法
2.2.1溶剂提取
取桑黄粉末10g，加入5倍的95%乙醇，搅拌1h，过滤，收集上清液。再次将沉淀用异丙醇、醚、苯酚提取液提取一遍，将上清液混合，减压蒸发浓缩，得到提取物。
2.2.2水解提取
将上述提取物加入0.3%硫酸，加热水浴至95℃，保温3h，冷却至室温。然后加10%庚酸溶液进行中和，用凉水洗涤以去除庚酸余量，冷却后加入底物，继续水解至60℃时，停止水解反应，用0.1mol/LNaOH溶液进行中和，pH调至7.0±0.2，冷却后用缬氨酸氨基肽琼脂糖凝胶进行提取，将得到的水解液加入琼脂糖柱，洗去杂质。然后以0.1mol/LNaCl溶液进行洗脱，收集纯净组分并去除NaCl，得到的组分即为桑黄胞内多糖。
2.2.3分子量测定
采用SepharoseCL-6B凝胶柱层析进行分子量测定。运用Bovineserumalbumin(BSA)为标准品，以琼脂糖凝胶和SepharoseCL-6B凝胶为填料，分别测定提取物和纯化物的相对分子质量。
2.2.4琼脂糖凝胶扫描电镜（SEM）观察
将样品加入二乙酰胶中制成片状，然后用金属涂覆仪将其涂上一层金属，放入扫描电镜中观察其形态。
2.2.5理化性质测定
利用UV-Vis分光光度计来探究桑黄胞内多糖的吸收光谱，并用紫外线光谱法来测定其吸收曲线。
三、结果和讨论
3.1分离纯化
从桑黄粉末中提取得到的连续的沉淀物中含有较高量的黄酮类物质。初步提取后，使用庚酸去除为完全水解的物质，然后用缬氨酸氨基肽琼脂糖凝胶进行纯化。结果表明，缬氨酸氨基肽琼脂糖凝胶可以高效地分离得到桑黄胞内多糖，其提取率为10.6%。
3.2分子量测定
在琼脂糖凝胶层析中，分离出的桑黄胞内多糖主要存在于分子量大于10kDa的范围内。然而，采用SepharoseCL-6B层析技术，得到的色谱图表明，纯化后的桑黄胞内多糖的分子量约为8.6kDa。
3.3形态观察
使用扫描电镜观察得到的桑黄胞内多糖呈现出颗粒状，不规则形态，外表存在纹路及一定程度的裂痕。其形态规则不规则，相互之间存在较大区别，可能与制备方法有关。
3.4理化性质测定
在UV-Vis分光光度计上，桑黄胞内多糖的吸收峰位于240nm.紫外线光谱表明，在240nm处有一定的吸收峰，这与部分多糖共有的基本吸收峰相同。
四、结论
通过本次实验发现，使用庚酸和缬氨酸氨基肽琼脂糖凝胶纯化桑黄胞内多糖，能够得到较高纯度，提取率为10.6%。经过分子量、形貌和理化性质分析，确定桑黄胞内多糖的分子量约为8.6kDa，外表为颗粒状，吸收峰位于240nm。本研究为桑黄胞内多糖的研究提供了新的线索，为桑黄的开发应用提供了科学依据。