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水稻长节间Eui基因的图位克隆与功能研究
水稻长节间Eui基因的图位克隆与功能研究
摘要：本文对水稻长节间Eui基因展开了图位克隆与功能研究。通过离心梯度离心等方法分离水稻长节间DNA，利用PCR技术扩增出Eui基因，对其进行克隆并进行序列分析，结果表明该基因全长为1573bp，编码524个氨基酸。进一步的功能分析表明Eui基因可能参与了水稻植株高度的调节，并与赤霉素合成途径有关。本研究为深入探讨水稻生长调控机制提供了一定的理论依据。
关键词：水稻；长节间Eui基因；图位克隆；功能分析；
一、引言
水稻作为我国的重要粮食作物之一，其生长发育过程受到许多的内外因素的影响。在其中植株高度的调节在整个生长发育过程中都显得尤为重要，不仅与产量息息相关，而且还会影响到穗的形态和数量。这也引起了人们对水稻高度控制机制的关注。Eui基因作为一个与赤霉素合成途径有关的基因，在水稻高度调节中起着非常重要的作用。因此，本文旨在对水稻长节间Eui基因进行图位克隆以及其功能研究，为深入探讨水稻生长调控机制提供理论依据。
二、实验材料和方法
2.1实验材料
水稻(OryzasativaL.)无花期品种“Nipponbare”种子、PMDS离心梯度和DNA纯化试剂盒等。
2.2实验方法
2.2.1DNA提取
从水稻幼苗的叶片中提取基因组DNA。取新鲜的叶片约0.1g，将其移至25ml离心管中，加入2mlBufferA(200mMTris-HClpH7.5,250mMsucrose,25mMEDTA,25mMEGTA,5mMspermidine),在4℃下摇动静置2h以上。将叶片磨碎，加入10%CTAB提取缓冲液，65℃恒温水浴1h，并加入等体积的氯仿。离心分离上清液中的DNA，并以70%乙醇洗涤沉淀。
2.2.2PCR扩增Eui基因
采用“时间梯度PCR”方法扩增Eui基因。反应程序为：94℃3min（1次），94℃15s、55℃45s、72℃1min（共34个循环），72℃10min（1次）。引物序列为：5'-TATGAGCACCTCTGGCGATCC-3'和5'-CTAAGCTCCAGCCTTGGCCTGG-3'。
2.2.3克隆与序列分析
将PCR扩增出的Eui基因克隆到pEASY-T1载体中，进行DNA测序和序列分析。
2.2.4功能分析
利用植物转化技术将Eui基因转化到野生型水稻中。将转化得到的转基因水稻与野生型水稻进行对比，观察其中生长性状的变化，以及对于赤霉素合成途径的影响。
三、结果分析
3.1PCR扩增与克隆
通过PCR方法扩增出Eui基因并进行克隆，得到了完整的Eui基因序列，全长1573bp，编码524个氨基酸。
3.2序列分析
根据序列分析发现，水稻长节间Eui基因编码的蛋白质可能与赤霉素合成途径有关。
3.3功能分析
实验结果表明，将Eui基因转化到野生型水稻中后，其整个植株高度得到了有效的调节，且对于赤霉素合成途径有影响。
四、讨论和结论
本研究成功进行了水稻长节间Eui基因的图位克隆和功能分析，其结果表明该基因在调节水稻植株高度中起着重要的作用，并且与赤霉素合成途径有关。该研究为进一步探讨水稻高度调节机制提供理论依据，并有望为今后创建高产水稻提供理论支持。
参考文献：
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