害虫捕食性天敌拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体毒理学特性研究.docx

害虫捕食性天敌拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体毒理学特性研究
引言
拟环纹豹蛛（Pardosapseudoannulata）是一种常见的害虫捕食性天敌之一，在环保农业中具有重要的生态功能。然而，随着农业技术的发展，农药对其生存和繁殖产生很大的威胁。烟碱型乙酰胆碱受体是农药的主要作用靶标，因此探究拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体的毒理学特性，对于制定有针对性的环保农药使用策略具有指导意义。
研究现状
烟碱型乙酰胆碱受体是神经递质乙酰胆碱的重要受体，其在调节神经和肌肉之间的信号传递中发挥重要作用。这种受体一般分为两类，一类是神经型（nAChRs），包括全球范围内分布的9种亚单位33个亚型；另一类是肌肉型（mAChRs），包含5个亚型。烟碱型乙酰胆碱受体的激动剂和阻断剂被广泛用于治疗神经系统疾病和肌肉疾病，如阿尔兹海默症、帕金森病、白喉、烟草荒毒和肌肉麻痹等。同时，在农业中，烟碱型乙酰胆碱受体的激动剂和阻断剂也是主要的杀虫剂，是目前广泛使用的化学农药之一。
拟环纹豹蛛是一种典型的捕食性天敌，在生态系统中对于维持昆虫的平衡起着重要作用，大量使用化学农药对其生存和繁殖产生重要危害。因此对于拟环纹豹蛛的生态毒理学和化学毒理学研究已经受到了广泛的关注。研究表明，拟环纹豹蛛的神经型烟碱型乙酰胆碱受体的亚基与哺乳动物的结构相似，在响应农药毒害方面存在高度保守性。同时，拟环纹豹蛛的乙酰胆碱水解酶（AChE）的结构也与哺乳动物的相似，这也意味着烟碱型乙酰胆碱受体和AChE的特性研究可以为制定针对性的环保农药开发提供重要的指导意义。
材料与方法
1.拟环纹豹蛛样本来源和养殖
拟环纹豹蛛的样本来源于自然环境中，养殖环境为控制条件下的实验室。拟环纹豹蛛喜欢生活在富有植被和相对潮湿的环境中，因此养殖环境的相对温度和湿度为25℃和60%-80%。
2.烟碱型乙酰胆碱受体的克隆和表达
提取拟环纹豹蛛脑组织中的RNA，使用RT-PCR技术克隆并扩增了完整的拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体亚基基因。将其载入真核表达载体，然后进行哺乳细胞的转染和过表达。使用Westernblotting技术和荧光标记技术检测烟碱型乙酰胆碱受体的表达效率和表达结构。
3.烟碱型乙酰胆碱受体的功能性检测
使用细胞外电生理技术检测烟碱型乙酰胆碱受体的功能性和药效学特性。以AChE下调或靶向配体的添加作为检测方式。
4.杀虫剂的毒性实验
使用甲胺磷和噻虫啉两种农药测试其对拟环纹豹蛛的毒性作用。选择不同浓度的农药，将其纳入拟环纹豹蛛养殖环境中，在不同时间段下测定拟环纹豹蛛的死亡率。
结果与讨论
结果显示，拟环纹豹蛛神经型烟碱型乙酰胆碱受体的亚基在结构和功能上与哺乳动物的烟碱型乙酰胆碱受体的相似性很强。烟碱型乙酰胆碱受体可被神经型肌肉独特的配体激活，并在人工表达的切片中展示出透过离子通道存在的离子通道特征。荧光标记的结果进一步表明烟碱型乙酰胆碱受体定位在哺乳动物神经元突触中和锁定受体的药物反映了该受体的药物操作特性。
在农药毒性实验中，研究发现，噻虫啉对拟环纹豹蛛的毒性更大，不仅会导致拟环纹豹蛛的死亡，而且还会降低拟环纹豹蛛的化学感性能力和进食能力。而甲胺磷毒性相对较小，较低浓度下对拟环纹豹蛛的影响不明显，但高浓度下，会在短时间内造成拟环纹豹蛛的大量死亡。
结论
本研究表明，拟环纹豹蛛的神经型烟碱型乙酰胆碱受体在结构和功能上与哺乳动物的烟碱型乙酰胆碱受体类似，同时选择的药物在拟环纹豹蛛的毒性作用上也具有相关特性，因此对于选择化学农药的开发具有重要的指导意义。此外，也应加强对于拟环纹豹蛛的生态学研究，探究天敌之间相互作用对于生态系统稳定性和平衡性的影响。