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大鼠骨髓来源树突细胞的体外培养及功能测定
绪论
树突细胞是高度专业化的抗原递呈细胞，具有自身免疫物质递呈能力和刺激T淋巴细胞产生免疫反应的能力。因此，树突细胞在疫苗研究、肿瘤免疫学等领域具有重要的研究价值。骨髓来源的树突细胞是一种可供大规模培养的细胞来源，因此本文将谈及大鼠骨髓来源树突细胞的体外培养及功能测定。
一、大鼠骨髓来源树突细胞的培养
1.材料与方法
a.大鼠骨髓收集：使用无污染的大鼠骨髓迅速取出红质，采用闪电冷冻保存。
b.培养基配置：使用DMEM(高糖）、10%FBS、1%P/S、2-β巯基乙醇、2.5%牛血清白蛋白等配置。
c.培养条件：在37℃,含5%CO2培养。
d.培养程序：制备细胞悬液-平板附着法-细胞素去污方法-细胞分离。
2.结果与分析
a.制备细胞悬液：将冷冻骨髓去除红细胞后，加入刚刚配置好的培养基，通过滤器过滤，制备成单个细胞悬液。
b.平板附着法：将细胞悬液加入无菌平板中，50%呼吸暴露于平流罩中，于3-4小时后，吸附在培养皿上的细胞形成很多小集落。
c.细胞素去污：在平板上形成小集落的细胞，使用不同浓度的纯碱或特殊试剂达到不同去污目的，将细胞样品放回培养皿。
d.细胞分离：将培养皿中的细胞用吸管或洒水稀释，收集其中的单个细胞。
二、大鼠骨髓来源树突细胞功能测定
1.外周血单个核细胞的单核细胞构成
a.材料与方法
i.社会成年大鼠在麻醉作用下取出外周血
ii.血液中的白细胞进行留置
iii.吸附涂片染色，用于评估教育皮炎的刺激（TDI）
b.结果与分析
i.外周血单核细胞多样
ii.涂片中，单个核细胞部分数量显著上升，其中以树突细胞为主。
iii.树突细胞可以通过TDI诱导活化，并对活化后的细胞进行刺激。
2.树突细胞的诱导及功能监测
a.材料与方法
i.培养4天的骨髓细胞在GM-CSF、IL-4的诱导下发生器官表面分化，形成成熟的树突细胞。
ii.树突细胞通过流式细胞术进行检测，监测细胞表面分子如CD14、CD11b是否表达。
iii.器官稳定后，在体外诱导细胞，如CD3、CD4T淋巴细胞在树突细胞辅助下的细胞活性的检测。
b.结果与分析
i.树突细胞在细胞因子介导的成熟过程中表达的CD14、CD11b明显下降。
ii.经过细胞因子诱导后的CD4+T细胞，在树突细胞的辅助下，增强对细胞危害的敏感性，并进一步激活T细胞。
结论
本研究建立了一种大鼠骨髓来源树突细胞的体外培养及功能测定方法，为病原体识别、肿瘤疫苗设计、抗原递呈及T细胞免疫应答等领域提供了一定的指导和参考。在未来的研究中，可以进一步完善这种方法，探究树突细胞在免疫学中的更广泛的应用。