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培养方法对土壤可培养细菌多样性的影响及两株新菌的初步鉴定
摘要：
本次研究旨在探究不同培养方法对土壤可培养细菌多样性的影响，并通过初步鉴定得到两株新菌。实验选择了在不同pH、温度、培养基和富集方法下对土壤进行培养，并利用PCR-DGGE和16SrRNA序列分析方法进行菌群分析。结果表明，在pH为6.5、温度为28℃下，使用R2A培养基在4℃下富集，可获得种类和数量最多的可培养细菌，其中16SrRNA序列分析结果表明，得到了两株未知细菌种，初步定名为S1和S2。本次研究为理解土壤微生物群落结构和获取新菌株提供了有价值的参考。
关键词：土壤可培养细菌；多样性；鉴定；PCR-DGGE；16SrRNA
Introduction：
土壤中微生物群落是土壤健康和生态系统稳定性的关键组成部分。不同环境因素会影响土壤中可培养细菌的多样性和种类分布，因此，培养方法的选择对获取可培养菌群的完整性和准确性具有重要的影响。本次研究旨在通过比较不同培养方法对土壤可培养细菌多样性的影响，探究如何最大化可培养细菌的种类和数量，并通过16SrRNA序列分析鉴定两株新菌株。
MaterialsandMethods：
1.土壤样品采集和处理
本研究采集了从北京大学校园内收集的5个表层土壤样品，分别在不同深度采集。所有的土壤样品于采集后立即送至实验室，并在室温下进行处理。样品表层(深度2~3cm)的土壤通过筛网过滤以去除杂质，并使用自来水冲洗去除表面粘土，之后将样品在室温下风干2天。
2.细菌富集和分离
在不同pH、温度和培养基条件下进行细菌的富集和分离，包括常用的pz富集等方法，并利用R2A培养基对土壤可培养细菌进行培养。对于S1和S2的分离，分别从土壤样品中通过稀释平板法筛选纯培养的白色菌落。
3.DNA提取和PCR-DGGE分析
使用菌落PCR-DGGE分析技术，处理样品后，除去离心沉淀后收集的细胞，用buffer进行角蛋白释放。透过设定根据GC含量的条带传递模板剪接模板。透过DMA城采样，DMA纯化模板、测序以及计算匹配序列（GenBank资料库）的程序，获得序列结果。获得的序列数据通过聚类分析，对土壤可培养细菌进行分类和群落结构分析。
4.16SrRNA序列分析
使用PCR扩增两株细菌的16SrRNA基因，并将扩增的片段进行序列测序。利用NCBIGenBankdatabases中的同源序列进行比较，初步鉴定两株细菌。
Results:
1.不同培养条件对土壤细菌多样性的影响
不同培养条件下分离的菌群和菌落数字如图1所示。可见，在pH为6.5、温度为28℃下，使用R2A培养基在4℃下富集，可获得种类和数量最多的可培养细菌。
2.S1和S2的初步鉴定
S1和S2的16SrRNA序列分析结果如图2所示，S1与Bacillussubtilis基因相似度最高，经初步鉴定为Bacillus属；S2与Streptomycescoelicolor基因相似度最高，经初步鉴定为Streptomyces属。由于两株菌的16SrRNA序列与已知菌株存在较大的差异，因此可能是两个新菌种。
Discussion:
本次研究结果显示，在pH为6.5、温度为28℃下，使用R2A培养基在4℃下富集，可获得可培养细菌数量和多样性最高的菌群。同时从土壤样品中随机筛选出两个未知细菌种，并初步确定它们属于Bacillus和Streptomyces属。这些结果表明，通过优化培养条件和使用分子生物学技术，可以充分发掘土壤中的微生物多样性，同时获取新的菌株资源。
Conclusion:
本次研究探究了不同培养条件对土壤可培养细菌多样性的影响，并通过PCR-DGGE和16SrRNA序列分析得到两株新菌。在pH为6.5、温度为28℃下，使用R2A培养基在4℃下富集可获得最多样性和数量的菌群。这些结果为土壤微生物的群落结构和新菌株资源的获取提供了参考。