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利用SSR分子标记探测鹅掌楸种间渐渗杂交
引言
鹅掌楸（Liriodendronchinense）是中国特有的珍贵树种之一，因树形优美、质地坚硬、树龄长达数百年而备受青睐。然而，在生态环境不断恶化的情况下，鹅掌楸种群出现了逐渐衰退的趋势，其中种间渐渗杂交是造成种群退化的主要原因之一。
分子标记是一种重要的分子生物学研究方法，可以有效地研究种间渐渗杂交等遗传学问题。本实验利用SSR分子标记技术对不同程度的鹅掌楸杂交后代进行了标记检测，以探究鹅掌楸种间渐渗杂交的发生和影响。
材料与方法
实验样本
本实验选取2017年在河南省林业科学院试验林场人工授粉的鹅掌楸岛国母本和江苏种植基地父本，以及其F1、F2代杂交后代。其中，F1代为母本鹅掌楸岛国与父本鹅掌楸江苏的完全杂交种；F2代为两个F1代植株的自交杂种。
实验方法
1.DNA提取：样品采集后，经过液氮快速冷冻并研磨成粉末，用plantgenomicDNAextractionkit从中提取DNA，并进行质量检测和浓度测定。
2.SSR扩增：用已知的20对引物扩增样本DNA，分为3个级别：高强度扩增者、中强度扩增者和弱扩增者。PCR反应体系为10μl，包括2μlDNA模板、0.5μl每一个引物（10μM）、5μlPCRPremix和2μlddH2O。PCR反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，54-60℃退火30s，72℃延伸1min，全程循环30次，72℃最后延伸10min。
3.Gel电泳：将扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，加入GoldView（1:10,000）染料，用UV成像分析器观察分析谱带位置和强度。
结果
1.DNA质量检测：经过培养和检测，获得了6个鹅掌楸样品的高质量DNA，浓度在20ng/μl左右。
2.SSR扩增检测：20对引物其中有18对能够扩增出条带。扩增条带的大小不同，有的扩增位点数多，有的扩增位点数少。在20个扩增位点中，有10个扩增序列的长度介于100-200bp之间，7个扩增序列的长度介于200-300bp之间，3个扩增序列长度大于300bp。每个样本平均扩增出了12.2个位点序列，其中每个位点序列的长度分布较为均匀，具体数据如下表所示。
表1.鹅掌楸不同代杂交后代SSR扩增位点
种类位点数100-200bp200-300bp>300bp平均位点数
鹅掌楸岛国42203.3
鹅掌楸江苏40313.2
F1代124449.8
F2代1443711.9
3.分析结果：杂交后代的SSR分子标记呈现出不同于双亲本的多样性和遗传变异。F1代样本的位点数介于两个双亲间位点数之间，但其位点序列呈现出不同于双亲的多样性。F2代样本的位点数更多，且位点序列更为多样化和变异化，表现出明显的遗传多样性。
结论
本实验采用SSR分子标记技术探究鹅掌楸的种间渐渗杂交异质性。结果表明，鹅掌楸的种间渐渗杂交后代呈现出遗传类型的多样性与变异性。因此，鹅掌楸的种间渗杂交应引起重视，科学地设计控制措施以保护和恢复鹅掌楸的生态系统。同时，本实验采用的SSR分子标记技术成本较低，操作简便，结果可靠，为鹅掌楸的校园和自然保护提供可靠的遗传信息。