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分子印迹-固相萃取牛奶中有机磷农药残留
随着农业的发展，农药在生产中得到了广泛的应用，使得粮食产量得到了大幅度的提高，但是其中的一些有机磷农药残留却给人类的健康带来了潜在的威胁。牛奶是人们日常生活中不可缺少的乳制品，然而，由于牛奶的原材料——饲料中可能存在农药残留，导致牛奶中也会存在有机磷农药残留物，这对人体健康产生潜在危害。因此，研究牛奶中有机磷农药残留的检测方法具有重要的现实意义。本文将介绍一种基于分子印迹技术与固相萃取的方法，用于牛奶样品中有机磷农药残留的检测。
一、有机磷农药的危害分析
有机磷农药是目前广泛使用的一种农药类别，它们的作用机理是通过对酶的抑制而导致害虫死亡。然而，这种农药在人体内具有相同的抑制作用，进而导致一系列神经及生理疾病的发生。比如，有机磷农药中比较常见的敌敌畏、马拉硫磷等残留物，会导致中枢神经系统的异常症状，如头晕、乏力、视力模糊甚至昏迷等。而长期摄入残留量较大的有害物质，则会导致慢性中毒，损伤人体内的生理器官甚至导致生命危险。
二、分子印迹-固相萃取检测原理
分子印迹技术是一种基于分子识别原理的高选择性的检测方法。分子印迹通过合成特定的固定相，并以待测物为模板，在固定相中形成序列特异性的空位，从而实现分子的选择性识别。在本研究中，以待检测的有机磷农药为模板分子，进行印迹。具体过程如下图所示：
（图一：分子印迹技术步骤）
固定相的制备要求具有明确的特异性，本研究中，我们选用甲基丙烯酸酯（MMA）作为单体来制备固定相。其制备方法较为简单，在首先以甲基丙烯酸（MA）与甲基己烷等反应物进行开链操作，随后加入MMA，在引发剂催化下进行聚合反应，形成均一且具有空位的聚合物。待固定相与模板分子决合后，洗涤后即可得到分子印迹固定相。
固相萃取（SPE）是一种常用的样品预处理方法。本研究中，我们采用具有高亲和力的SPE吸附固定相来寻找牛奶样品中的有机磷农药残留。固定相中的大孔径可以选择性地吸附不能被挥发的组分，其中包括范德华力、离子和配位。固定相具有孔径大小、化学成分、对待测样品的高选择性、快速性、可靠性及低成本等优点。如图二所示，牛奶样品中的杂质成分在固定相中被吸附，待洗脱后，有机磷农药残留物保留在固定相中，经定量分析，即可确定待检测样品中是否存在2的有机磷农药类残留。
（图二：固相萃取技术原理）
三、实验方法步骤
1、准备固定相
制备固定相的具体步骤如下所示：
(1)按照比例混合甲基丙烯酸酯（MMA）、甲基己烷等反应物、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、辣根过氧化物酶（HRP）和敌敌畏。
(2)将反应混合物放入硬化的模板内，并在约2h内混合进气体及常温下震荡24h。
(3)分别用以酒精溶液淬住三次，并将固定相剥离出模板。
2、SPE的准备
（1）将100mg固定相与空白吸附管+NY,AVY融合吸附剂混合加入到1ml规格的萃取筒中；
（2）加入1ml蒸馏水洗涤，以使吸附剂积累到十分均匀。随后将管中的液体排除。
3、样品处理
（1）将10mL的原料牛奶样品加入在以上吸附剂中；
（2）在25°C环境温度下搅拌25min以促进吸附的发生；
（3）将管内多余液体排除，洗涤固相吸附的有机磷农药残留物；
（4）以10ml甲醇电子释放固相，对电荷平衡进行处理，获得更高的含量；
（5）待萃取后的样品挥干，并溶于5ml的甲醇中，通过准确性和精度对其中的有机磷农药类残留进行分形分析。
四、结果与分析
在本研究中，我们采用分子印迹-固相萃取技术成功的检测出了待测样品中的有机磷农药残留类物质，并进一步从中分离出了敌敌畏、马拉硫磷等具有亚致命器官作用的化合物，为牛奶安全等级的提高提供参考。同时，本研究所采用的检测方法具有成本低、可重复性高等优点，能够在现有的技术手段下快速、准确的实现牛奶中有机磷农药残留的检测。
总之，分子印迹-固相萃取技术是一种技术成熟且前景广阔的检测方法，具有高度的选择性和敏感度等优点，可用于研究其他农产品中的有机磷残留物，提高人民生活品质，保护公众健康水平。