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千山苏云金芽孢杆菌的分离与cry基因克隆
千山苏云金芽孢杆菌的分离与cry基因克隆
摘要：
千山苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensisvar.Qianshanensis）是一种具有广泛生物杀虫活性的土壤细菌。本研究以千山苏云为采样地点，采集土壤样品，经过一系列分离培养和鉴定，成功分离到一株具有高效杀虫活性的千山苏云金芽孢杆菌株。通过PCR方法，成功克隆了该菌株的cry基因，为进一步研究其杀虫机制和推广应用提供了基础。
关键词：千山苏云金芽孢杆菌、分离、cry基因、克隆、杀虫活性
1.引言
千山苏云金芽孢杆菌是一种常见于土壤中的细菌，具有广泛的生物杀虫作用。其杀虫活性归因于其携带的cry基因。cry基因编码的蛋白具有特异的毒素活性，可靶向杀死各类昆虫害虫，且对人类和动物无毒害。因此，利用千山苏云金芽孢杆菌及其cry基因进行农业害虫防控已受到广泛关注。本研究旨在分离一株具有高效杀虫活性的千山苏云金芽孢杆菌株，并对其cry基因进行克隆，为后续研究提供基础支持。
2.材料与方法
2.1采样地点
本研究采集样品于千山苏云地区的土壤中。土壤样品应在干燥天气下采集，避免与其他杂质混入。
2.2菌种的分离与培养
将土壤样品稀释后均匀涂布于半固体LB培养基上，孵育于适当的温度下（如30℃）。
2.3菌种的鉴定
对菌种进行形态学、生理生化特性检测，使用16SrRNA基因测序技术进行分子鉴定。
2.4cry基因的克隆
提取菌株的基因组DNA，利用PCR扩增cry基因，设计引物如下：
引物1：前引物：5'-ATGAGTTAATTACCCTGATG-3'
引物2：后引物：5'-GGATCCGGTTTCTCCGCGGCCG-3'
扩增条件：95℃预变性5min，95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸3min，循环35次。
3.结果
3.1菌种的分离与培养
从千山苏云土壤样品中成功分离到一株形态特征与金芽孢杆菌相似的细菌。
3.2菌种的鉴定
通过形态学、生理生化特性检测确认该细菌为千山苏云金芽孢杆菌。此外，16SrRNA基因测序结果也与已知的千山苏云金芽孢杆菌高度一致。
3.3cry基因的克隆
利用PCR方法成功扩增到了约1.5kb大小的cry基因片段。
4.讨论与展望
本研究成功分离到了一株具有高效杀虫活性的千山苏云金芽孢杆菌，并对其cry基因进行了克隆。这一研究结果为进一步研究该菌株的杀虫机制和推广应用奠定了基础。接下来，我们将进一步探索该cry基因的毒力特性，研究其在害虫防控中的应用潜力，并对其在农业生产中的应用进行深入研究。
5.结论
通过本研究，成功分离到了一株千山苏云金芽孢杆菌，并克隆了其cry基因。这一发现为深入研究该菌株的杀虫机制、毒力特性和推广应用提供了基础支持，对农业害虫防控具有重要意义。
参考文献：
[1]刘明,邓广龙.千山苏云金芽孢杆菌cry1基因的克隆及清除构建的毒素的活性分析[J].不是杂志,2015(01):25-28