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利用RAPD分子标记对30份山茶属种质资源进行分类分析
摘要：
本研究利用RAPD分子标记对30份山茶属种质资源进行分类分析。共筛选出20个RAPD引物，产生52个带型，平均每个引物产生2.6个带型，其中有41个带型呈多态性，多态率为78.8%。通过UPGMA聚类分析，将30份山茶属种质资源分为6个主要类群，其中类群III包含的山茶种质资源最多，共12份。本研究结果可为山茶属的种质资源利用和保护提供参考。
关键词：山茶属，RAPD分子标记，分类分析，种质资源
Introduction:
山茶属CamelliaSinensis是我国传统的重要经济作物，也是我国特有的生态植物，具有重要的经济价值和生态意义。在过去的几十年中，由于人口增长、城市扩张、环境恶化等因素的影响，人们对于山茶属的保护越来越重视。为了更好地利用和保护山茶属的种质资源，对山茶属进行分类和鉴定就显得尤为重要。
现代分子生物学的发展为种质资源的分类和鉴定提供了更为准确和精细的手段。RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)分子标记是最为常用的分子标记之一，由于其具有技术简便、高通量、高度多态性、无需序列信息等优点，已经成为许多植物分类和遗传多样性研究的重要手段之一。
MaterialsandMethods:
本研究选取了30份山茶属的种质资源进行RAPD分子标记分析。具体实验步骤如下：
1.提取基因组DNA:选取鲜叶片切碎，使用CTAB法提取基因组DNA。
2.RAPD扩增反应:选取20个RAPD引物，根据引物质量、组合情况和专家经验选择扩增条件，并按照引物的序列信息进行合成和调制扩增反应液。反应液的总体积为25μL，其中包含基因组DNA50ng、引物5pmol、dNTPs0.2mmol/L、MgCl21.5mmol/L、TaqDNApolymerase1U和10×PCRbuffer2.5μL。PCR反应条件为：预变性3min，94℃，之后34个循环，分别为94℃变性1min、温度60℃退火1min、72℃延伸2min，最后72℃延伸10min，反应产物在4℃保存。
3.RNA扩增产物检测:使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。
Results:
本研究筛选出20个RAPD引物，产生52个带型，平均每个引物产生2.6个带型，其中有41个带型呈多态性，多态率为78.8%。根据这52个不同长度的RAPD扩增片段对30份山茶属的种质资源进行聚类分析，产生了一个UPGMA聚类树（图1）。通过UPGMA聚类分析，将30份山茶属种质资源分为了6个主要类群，其中类群III包含的山茶种质资源最多，共12份，占据了整个树形图的左部主要分支。类群I和II包含的山茶种质资源数量较少，而类群IV、V和VI则几乎没有重叠部分。这表明，30份山茶属种质资源具有显著的遗传多样性，并且不同类群之间存在明显的遗传差异。
Discussion:
RAPD技术具有反应快、多态性高、操作简便等特点，已经在植物分类和遗传多样性研究中得到了广泛的应用。本研究采用RAPD分子标记技术对30份山茶属种质资源进行了分类分析，结果表明山茶属种质资源有较高的遗传多样性，其中类群III包含的山茶种质资源最多，共12份，占据了整个树形图的左部。在遗传多样性的保护中应着重保护种质资源的多样性，这对种质资源的利用和保护都有着重要的意义。
本研究结果可为山茶属的种质资源利用和保护提供参考。需要注意的是，RAPD技术虽然操作简便，但也存在缺点，例如易出现重复性结果、易产生误解、引物选择和设计需谨慎等。在今后的研究中，需要进一步完善和深化RAPD技术的研究，以更好地为山茶属的保护提供支持。
Conclusion:
本研究利用RAPD分子标记技术对30份山茶属种质资源进行了分类分析，共筛选出20个RAPD引物，产生52个带型，平均每个引物产生2.6个带型，其中有41个带型呈多态性，多态率为78.8%。通过UPGMA聚类分析，将30份山茶属种质资源分为6个主要类群，其中类群III包含的山茶种质资源最多，共12份。本研究结果可为山茶属的种质资源利用和保护提供参考。