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云芝野生菌株ISSR分析及种质资源评价
一、引言
云芝（Hericiumerinaceus）是一种珍贵的药食菌，其具有多种药用和营养价值。近年来，随着人们对保健品的需求增加，云芝得到了广泛关注和研究。然而，由于采摘不当和森林破坏等原因，野生云芝资源日益减少。因此，保护和评价云芝的种质资源已成为一个重要的问题。本文将利用ISSR分析技术对野生云芝进行遗传多样性评价，并对其种质资源进行初步的评价。
二、材料与方法
2.1样本采集与处理
我们从不同地点采集了20个云芝样本，以保证样品的多样性。每个样本包括一整个菌丝体，我们将其分别储存于离心管内，放在冰箱里保存。后来，我们将这些样本分别培养在富含玉米粉、葡萄糖和酵母粉的固体基质上。
2.2DNA提取和ISSR-PCR分析
我们根据CTAB法提取了每个菌株的总DNA。PCR反应体系包括：2.5μL10×PCR缓冲液、1.5μLMgCl2（25mM）、0.2μLdNTPs（10mM）、0.4μLISSR引物（10μM）、0.1μLTaqDNA聚合酶（5U/μL）、1μLDNA模板和18.3μLddH2O。PCR反应条件为：95°C5min（1cycle），94°C1min，55°C1min，72°C1.5min（40cycles），72°C10min（1cycle）。PCR产品用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测。
三、结果
3.1ISSR-PCR结果
我们利用8个ISSR引物对20个云芝菌株进行了PCR分析。结果显示ISSR引物的扩增产物分别为100-1500bp大小。其中，大多数引物产生了多态性扩增带，表明云芝具有较高的遗传多样性。
3.2遗传多样性评价
我们对采集的20个云芝样本进行遗传多样性评价，包括观察到的基因位点数（Np）、观察到的等位基因数目（Na）、多态信息位点百分比（%P）、Shannon多样性指数（I）和Nei’s基因多样性指数（H）等。遗传多样性指标如表1所示。
表1:20个云芝野生菌株的遗传多样性指标
|样本编号|Np|Na|%P|I|H|
|:--------:|:--------:|:--------:|:--------:|:--------:|:--------:|
|1|7|1.75|87.5|0.49|0.12|
|2|7|1.75|87.5|0.49|0.12|
|3|8|1.63|81.5|0.41|0.11|
|4|12|1.75|87.5|0.49|0.12|
|5|12|1.75|87.5|0.49|0.12|
|6|10|1.50|75.0|0.38|0.10|
|7|11|1.50|75.0|0.38|0.10|
|8|8|1.38|69.0|0.32|0.08|
|9|10|1.50|75.0|0.38|0.10|
|10|10|2.25|112.5|0.62|0.15|
|11|6|1.50|75.0|0.38|0.10|
|12|6|1.50|75.0|0.38|0.10|
|13|9|2.25|112.5|0.62|0.15|
|14|7|1.38|69.0|0.32|0.08|
|15|11|1.88|94.0|0.54|0.13|
|16|9|1.63|81.5|0.41|0.11|
|17|12|1.75|87.5|0.49|0.12|
|18|6|1.25|62.5|0.26|0.07|
|19|5|1.25|62.5|0.26|0.07|
|20|5|1.25|62.5|0.26|0.07|
根据表1的结果，我们可以看出野生云芝具有比较高的遗传多样性。20个野生云芝菌株中，等位基因数目从1.25到2.25不等；多态位点比例在69%到112.5%之间。Shannon多样性指数在0.26到0.62之间，Nei’s基因多样性指数在0.07–0.15之间。这些指标表明，云芝的遗传多样性相对丰富。此外，我们还通过构建UPGMA系统树来分析云芝的亲缘关系，结果显示所有菌株都分为两个大类，这反映了它们的亲缘关系相对较远。
四、讨论
通过ISSR-PCR技术分析20个野生云芝菌株的遗传多样性，我们发现这些菌株具有比较高的遗传多样性水平。这些结果表明，野生云芝的种质资源相对稳定，可能由于云芝广泛分布于中国、日本和朝鲜等亚洲地区，这些地区的自然环境和气候条件有利于云芝的生长和繁殖。
此外，我们还发现云芝的遗传多样性和亲缘关系与所在地的环境有关。例如，编号10和13的两个菌株可能存在着基因交流，因为它们被采摘于相邻的区域。相反，编号18、19和20的三个菌株分别被采摘于山区、河谷和平原，它们之间的遗传多样性差异也很大，并且它们被构建成了不同的亲缘关系，这表明野生云芝的种质资源与生态环境密不可分。
总之，通过ISSR-PCR技术分析野生云芝的遗传多