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乳化异氟醚对乳鼠原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤的影响
摘要：
本文旨在探究乳化异氟醚对乳鼠原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤的影响。研究结果表明，乳化异氟醚能够降低心肌细胞缺氧复氧损伤所带来的细胞死亡率、细胞色素C的释放、线粒体膜电位的下降以及复氧后的氧化应激反应，同时乳化异氟醚还能降低缺氧复氧对心肌细胞超氧化物歧化酶活性的抑制作用。综上所述，乳化异氟醚对于心肌细胞缺氧复氧损伤有明显的保护作用，可望成为心肌缺血/再灌注损伤治疗的一个新的策略。
关键词：乳化异氟醚；心肌细胞；缺氧复氧损伤；超氧化物歧化酶；氧化应激
Introduction:
缺血心脏病是目前全球死因的主要原因之一，经常会导致心肌细胞的死亡，因此缺血/再灌注(I/R)损伤机制的研究引起了广泛关注。心肌细胞体内的氧化应激反应和氧自由基反应对I/R损伤的发生和程度起重要作用。而乳化异氟醚作为一种适用于全麻的麻醉剂，其具有局部、快速和明显的镇痛麻醉效果，已成为目前临床常用的麻醉药物之一。此外，乳化异氟醚还具有一定的抗氧化能力，但其对心肌细胞的缺氧/复氧损伤的影响尚未有详细研究报告。
Materialsandmethods:
1.原代培养心肌细胞的制备
乳鼠的心脏切片移植到含有1mg/ml胰酶和0.14mg/ml胆酸的生长基中，37℃恒温振荡30分钟，离心去色素、组织碎片和细胞碎片后，上清液用明胶渗滤器过滤，用含10%胎牛血清的DMEM育培养箱培养，但在实验前24小时，去掉胎牛血清。
2.细胞药物处理
在缺氧诱导前，培养基中加入不同的乳化异氟醚浓度，分别处理24小时。然后将细胞缺氧2小时，接着再进行复氧处理2小时，然后继续离心剥离细胞进行后续分析。
3.细胞死亡率测定
用三(4,5-二甲基噻唑-2-巯基)-2,5-二苯基三唑氯化物(MTT)法测定细胞存活。经皮质丝蛋白C释放后，制备原位细胞块的薄片，进行TUNEL荧光检测细胞凋亡。
4.线粒体膜电位(MMP)的测定
采用5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四甲基类似苯氮啉单甲基酯(DiOC6(3))染色法检测细胞MMP的变化。
5.氧化应激测定
采用马来酰亚胺二甲氧基苄基酮(Mannichreagent)检测超氧离子(O2–)的生成量，同时使用西化染色法测定总抗氧化能力和过氧化氢酶(CAT)活性。
Results:
1.乳化异氟醚降低心肌细胞缺氧复氧损伤的发生率
采用MTT法和TUNEL染色法可以测得细胞死亡率。实验结果表明，与对照组相比，乳化异氟醚处理组心肌细胞死亡率下降。
2.乳化异氟醚降低心肌细胞缺氧复氧后线粒体膜电位降低和色素C释放
通过DiOC6(3)染色法和免疫印迹法可以检测到缺氧复氧条件下心肌细胞线粒体膜电位下降和色素C释放，乳化异氟醚处理明显能够降低上述变化。
3.乳化异氟醚降低心肌细胞缺氧复氧后的氧化应激反应
实验结果显示，缺氧复氧后心肌细胞产生了明显的氧化应激反应，包括超氧化物离子的生成，总抗氧化能力的下降以及CAT活性的下降，通过乳化异氟醚处理，对上述变化有明显的修复作用。
Conclusion：
本文研究结果表明，乳化异氟醚处理能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤所产生的细胞死亡率、线粒体膜电位的下降和色素C释放。同时，乳化异氟醚处理能够修复缺氧/复氧后的氧化应激反应，提高超氧化物歧化酶的活性，保护心肌细胞免受I/R损伤。因此，乳化异氟醚可望成为心肌缺血/再灌注损伤治疗的一个新的策略。这些结果为乳化异氟醚的开发和使用提供了重要的理论基础。