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人参鲨烯合成酶基因的克隆与初步表达研究
摘要：
人参鲨烯合成酶是人参三萜类物质中的重要合成酶，其在人参营养素合成中起到了至关重要的作用。本研究中，利用PCR技术从人参基因库中克隆了人参鲨烯合成酶基因，并将其成功表达在大肠杆菌中。经过初步鉴定，所表达的人参鲨烯合成酶具有一定的活性，为进一步研究人参营养素合成提供了一定的基础。
关键词：人参鲨烯合成酶、克隆、表达、PCR
引言：
人参是一种重要的中药材，在中药方剂中有着广泛的应用。人参的主要活性成分是三萜类化合物，其中鲨烯是一种重要的类萜烯物质，具有许多对人体有益的生物活性。因此，研究人参中鲨烯的合成机制对人参的生产和品质控制具有重要意义。
人参鲨烯合成酶是人参三萜类物质中的重要合成酶，其在人参营养素合成中起到了至关重要的作用。然而，目前对于人参鲨烯合成酶基因的研究还比较有限，因此本研究旨在通过克隆和表达人参鲨烯合成酶基因，研究其在人参中的生物合成机制。
材料与方法：
1.实验材料
人参基因库、大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)、pET-28a(+)质粒
2.克隆人参鲨烯合成酶基因
从人参基因库中选择性状优良、含有鲨烯合成酶活性的样品。利用PCR技术克隆人参鲨烯合成酶基因，PCR扩增条件为：95°C预变性2min，95°C变性30s，60°C退火30s，72°C延伸2min，循环30次，72°C终止延伸10min。
PCR产物经过凝胶电泳分析后，选取目的片段进行回收、纯化。将PCR产物与pET-28a(+)质粒进行酶切，经过回收、粘接、转化、筛选后，得到重组质粒pET-28a-PSY。
3.表达人参鲨烯合成酶基因
将重组质粒pET-28a-PSY转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，在含有1mM的IPTG的LB培养基中诱导至发酵，进行表达。
经摇床振荡12h时，对样品进行采集、离心、振荡和孵育，最终得到目的样品。
4.初步分析表达结果
采用酶学方法、SDS-PAGE电泳法、Westernblotting方法等对表达结果进行初步分析。
结果与讨论:
1.克隆人参鲨烯合成酶基因
通过PCR扩增，得到了预期长度的人参鲨烯合成酶基因片段，其长度约为1600bp。
2.建立重组体系
将PCR产物与pET-28a(+)质粒进行酶切，经过回收、粘接、转化、筛选后，得到重组质粒pET-28a-PSY。
3.表达人参鲨烯合成酶基因
经过诱导表达，成功表达了人参鲨烯合成酶。
4.初步分析表达结果
通过酶学方法和SDS-PAGE电泳法测定，表明所表达的人参鲨烯合成酶具有一定的活性。通过Westernblotting技术，也证实了所表达蛋白的存在。
结论：
本研究成功克隆和表达了人参鲨烯合成酶基因，并且证实所表达的蛋白具有一定的活性。这为进一步研究人参中鲨烯的生物合成机制提供了一定的基础。
参考文献：
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