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乳腺癌HER2neu基因荧光原位杂交诊断体系的建立及应用
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，而HER2neu基因作为乳腺癌的遗传变异因素之一，一直备受关注。HER2neu基因荧光原位杂交（FISH）是目前较为常见、可靠的诊断乳腺癌HER2neu基因状态的方法之一，利用荧光探针与目标DNA的互补配对来检测HER2neu基因的扩增或缺失情况，因此逐渐成为乳腺癌的诊断、治疗和预后评估的重要手段之一。
一、HER2neu基因的基本特征
HER2neu基因属于酪氨酸激酶受体家族，位于人类染色体17q21-22区间，编码165kDa的跨膜蛋白酪氨酸激酶受体2（HER2/neu或c-erbB-2），是一个封闭的单链多肽。它是一种细胞生长催化剂，不能表达和表现正常细胞周期调控，其异常表达、扩增或突变常常会引起肿瘤发生和发展，而目前HER2neu扩增或过度表达，则成为判断乳腺癌分子分型和治疗指南的重要依据，HER2neu阳性表达与HER2neu激动剂治疗感受性相关。
二、HER2neu基因荧光原位杂交技术
HER2neu基因荧光原位杂交技术是目前最常用的检测HER2neu扩增/缺失的方法之一，其原理是将亲核碱基对特异性的荧光探针引物与被测乳腺癌组织切片上的互补目标序列杂交，通过对杂交信号的分析，定量确定HER2neu扩增和缺失情况、增量倍数、基因组分型。它的检测结果被广泛运用于评估HER2neu阳性表达率、HER2neu高表达和HER2聚集、HER2neu内部荧光杂交等，同时它的可靠性和准确性越来越得到认可。
三、HER2neu基因荧光原位杂交诊断体系的建立
1.样本采集与处理
首先，需要获取乳腺癌组织样本，在外科切除或穿刺术病理检查时取材，一般建议根据患者的病情、癌症类型、所在部位和实体积等最佳的切取规模，确保良好的组织完整性。然后，切取的组织需在几小时内进行初步处理，如冰冻、固定或加工，以便后续研究时能够得到优质的信息。
2.荧光原位杂交试剂准备与操作
常用的荧光原位杂交试剂有Vysis公司的HER2/neuFISH试剂、Dako公司的HER2/neuFISHPharmDX试剂。在进行HER2neu基因荧光原位杂交前，需要首先准备相应的试剂，根据标准操作操作步骤，对试剂进行配制、稀释、预处理等操作，以获得最优的信号强度和图像清晰度。然后取组织切片，进行荧光原位杂交，具体操作步骤如下：
(1)从石蜡包埋切片中选取一份切片。
(2)制作切片样品的荧光原位杂交标准液。
(3)在切片上覆盖一个长着细菌的玻片。
(4)在黑暗机房中进行杂交。
(5)通过特定的荧光组合染色，显微镜下观察信号。
(6)将观察结果与准确的分析结果比较，评估HER2neu基因扩增和缺失情况。
3.获取结果并评估
通过运用HER2neu基因荧光原位杂交技术，可以获得诊断结果，并对其进行评估。HER2neu扩增是指HER2neu基因组中存在3个或多个信号，或HER2/CEP17比值大于等于2.0。HER2neu缺失是指HER2neu基因组中存在于CEP17信号每个细胞中的信号数目（即CEP17/HNMP或CEP17x2）少于2个；说明HER2neu基因存在单拷贝缺失。如果这一比率处于1.8至2.0之间，则为低水平HER2neu扩增，需要考虑进一步检测。根据这些测量值和客观指标，可以对HER2neu基因状态进行详细描述，进而制定精准的治疗方案。
四、应用价值
HER2neu基因荧光原位杂交技术在乳腺癌诊断中有着广泛的应用价值，不但可以检测HER2neu基因的扩增或缺失情况，还可以用于评估HER2neu的表达水平和分型，影响患者治疗方案和预后选择。HER2neu基因扩增或高表达与HER2neu激动剂治疗感受性相关，如扩增，曾被认为是HER2neu阳性的风险，可以严格选择HER2neu激动剂治疗。因此，HER2neu基因荧光原位杂交技术为临床医生提供了更加高效和可靠的乳腺癌诊断和治疗指导方案支持，逐渐成为了乳腺癌个体化治疗的必要手段。