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UTRN基因在肾癌组织中RNA水平及蛋白质水平的表达分析
UTRN基因在肾癌组织中RNA水平及蛋白质水平的表达分析
摘要：
UTRN基因在肾癌中的表达和其与肾癌的关系一直备受关注。本研究探究了UTRN基因在肾癌组织中RNA水平和蛋白水平的表达情况。通过实时荧光定量PCR和免疫印迹分析，本研究发现UTRN基因在肾癌组织中的表达水平显著低于正常组织。赤霉素对UTRN基因表达的影响也在本研究中被发现，赤霉素在肾细胞系中诱导UTRN基因表达增加，提示UTRN基因可能是赤霉素诱导肾癌细胞凋亡的一个潜在标志物。本研究结果为深入探究UTRN基因在肾癌发生机制中的作用提供了理论基础。
关键词：UTRN基因；肾癌；RNA水平；蛋白质水平；赤霉素
引言：
UTRN基因是位于人类染色体1p36的一个众所周知的基因，其编码的蛋白质是一个多肽链分子，分子量约为220kDa，在肌肉和非肌肉组织中都有表达（1）。UTRN是一种骨架糖蛋白，成为翼状肌纤维的一个组成部分，此外UTRN还在其他器官和组织中有表达，如肝，肾和听神经等。UTRN蛋白与肌肉细胞的钙平衡调节有关，是一个必须的辅助因子，UTRN与钙通道蛋白共同作用，可以促进肌肉细胞的肌肉收缩和放松，从而保持骨骼肌力学功能（2）。除此之外，UTRN还被认为是细胞生长的重要调控因子，与某些类型的肿瘤如肾癌的发生有关（3）。
肾癌是影响人们生活质量和预后的一种恶性疾病。从全球范围来看，肾癌的发生率在近年来逐年递增。虽然肾癌的发病机制尚不明确，但多种遗传和环境因素被认为是肾癌的发病原因之一。UTRN基因在肾癌的发生中扮演着重要的角色，尤其是在重症肾癌的患者中，UTRN基因在癌组织中的表达水平可能与预后有关（4）。本研究旨在探究UTRN基因在肾癌组织中的RNA水平及蛋白质水平表达情况，为深入探究UTRN基因在肾癌发生中的作用机制提供理论依据和实验基础。
实验方法：
1.组织样本和细胞系
本实验收集了10例肾癌患者的癌组织和相应的癌旁组织，并采用实时荧光定量PCR技术分析UTRN基因的RNA水平表达情况。肾癌细胞系786-O，769-P和A498和正常肾上皮细胞HK-2细胞系，用于免疫印迹实验。
2.RNA提取和实时荧光定量PCR
使用Trizol试剂（Invitrogen，美国）提取组织RNA，并随机选择3份癌细胞组织和3份癌旁组织进行实时荧光定量PCR分析。使用逆转录酶（Roche，德国）转录RNA到cDNA，并应用SYBRGreenI（Invitrogen,USA）实时荧光定量PCR识别UTRN基因的基因表达水平。
3.蛋白提取和免疫印迹
使用RIPA缓冲液（Beyotime,中国）提取肾癌细胞系和正常肾上皮细胞HK-2的蛋白，通过免疫印迹测试分析UTRN蛋白的表达。使用β–-actin作为内部参照蛋白质。
4.赤霉素处理
肾癌细胞系（786-O和A498）在ab胎牛血清培养基中生长至70%的细胞密度，并使用赤霉素作为干预剂，通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测UTRN基因在肾癌细胞系中的表达水平。
实验结果：
1.UTRN基因在肾癌组织中的表达水平显著低于正常组织
通过实时荧光定量PCR分析，并将正常肾组织和肾癌组织中RNA水平的UTRN基因表达量进行比较，发现UTRN基因在肾癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织及正常组织（P<0.01）。结果表明，在肾癌组织中UTRN表达受到了严重的抑制（图1）。
图1.UTRN在肾癌和相应癌旁组织中的RNA水平表达
2.赤霉素能够调控UTRN基因在肾癌细胞系中的表达水平。
为了分析UTRN是否受到赤霉素的调控，本研究利用赤霉素干预剂处理肾癌细胞系，以观察UTRN基因的表达变化。实验中，赤霉素在786-O和A498细胞中均有明显的UTRN基因表达增加，表明UTRN基因可能是赤霉素诱导肾癌细胞凋亡的一个潜在标志物（图2）。
图2.赤霉素处理后UTRN在肾癌细胞中的表达
3.UTRN蛋白在肾癌细胞系和正常肾上皮细胞中的表达
通过免疫印迹检测UTRN蛋白在肾癌细胞系中的表达水平。结果表明，UTRN蛋白在肾癌细胞系中的表达水平明显低于正常肾上皮细胞HK-2细胞株。这表明肾癌以及其他恶性肿瘤可能通过抑制UTRN的表达，提供一种直接的机制来促进肿瘤的发生和进展（图3）。
图3.UTRN蛋白在肾癌细胞系和正常肾上皮细胞中的表达
讨论：
UTRN基因在多种人类癌症，包括肾癌中的角色和意义一直是一个热点的研究方向。虽然已确认UTRN基因在肌肉细胞中的作用是消除细胞毒性产生的自由钙离子，但UTRN基因在肾癌细胞中的具体作用还是一个未被解决的问题。在本研究中，我们对UTRN基因在肾癌中的表达进行了探究。
我们的实验结果表明，UTRN基因在肾癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织及正常组织。这一结果表明