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恩格列净通过抑制内质网应激对糖尿病心肌细胞凋亡的影响的中期报告
恩格列净通过抑制内质网应激对糖尿病心肌细胞凋亡的影响的中期报告
背景
糖尿病是一种代谢疾病，全球范围内的发病率不断增加。糖尿病心肌病是指心肌细胞损伤和心肌功能受损，是糖尿病患者心血管并发症的主要原因之一。内质网应激是引起糖尿病心肌细胞凋亡的一个重要机制，使得糖尿病患者的心肌细胞发生失调和死亡。因此，寻找新的心肌保护剂，不断探索糖尿病心肌细胞凋亡的信号转导途径，将有可能成为糖尿病心肌病治疗的一个有效策略。
恩格列净是一种新型的糖尿病治疗药物，属于二肽基肽酶（DPP-4）抑制剂，具有调节GLP-1、GIP等肠道激素的作用。近年来研究表明，恩格列净还具有心脏保护作用，尤其是对心肌损伤和心血管疾病的预防和治疗有着显著效果。
研究目的
本研究旨在探究恩格列净在内质网应激条件下对糖尿病心肌细胞凋亡的影响，探究其作用机制，为进一步研究糖尿病心肌病的治疗提供理论基础。
研究方法
1.细胞培养和处理
取人心肌细胞（H9C2细胞株），在37°C、5%CO2的培养条件下，以DMEM培养基（添加10%FBS和1%青霉素/链霉素）将其培养至80%的密度。细胞分为3组，分别为正常对照组、内质网应激诱导组和恩格列净预处理组。
在内质网应激诱导组中，在培养基中加入1μM培养48小时的Tunicamycin（TM），使心肌细胞产生内质网应激。
在恩格列净预处理组中，先给心肌细胞加入100nM的恩格列净（预处理24小时），再加入1μMTM诱导48小时。
正常对照组则继续使用正常的培养基进行培养。
2.细胞凋亡测定
在上述处理后，采用流式细胞术（FACScanAlgrithm）和AnnexinV–FITC/PI染色法，来分析内质网应激和恩格列净处理对糖尿病心肌细胞凋亡的影响。
3.蛋白质表达情况的检测
利用Westernblot法，检测GRP78、CHOP、Bax、Bcl-2、Caspase3蛋白表达情况及p-ERK、ERK等相关蛋白的表达情况。
结果
1.恩格列净抑制了内质网应激诱导的糖尿病心肌细胞凋亡
AnnexinV–FITC/PI染色法显示，内质网应激诱导后，糖尿病心肌细胞的凋亡率显著增加（P<0.05），而恩格列净预处理组明显减少（P<0.05）（图1）
2.恩格列净下调内质网应激信号通路
Westernblot显示，在内质网应激诱导后，GRP78、CHOP、p-ERK、Caspase3的表达明显上调；而恩格列净预处理后，GRP78、CHOP、p-ERK、Caspase3的表达明显下降，Bcl-2的表达增加，Bax的表达减少（图2）。
结论
本研究结果表明，糖尿病心肌细胞内质网应激可能是促进心肌细胞凋亡的关键机制之一，而恩格列净通过下调内质网应激信号通路，对糖尿病心肌细胞的凋亡发挥了保护作用。
此次中期报告结果将为糖尿病心肌病的治疗提供新的思路和可能的药物选择，为进一步研究心脏保护和心血管疾病治疗提供了指导。