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NGALmRNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步评价
NGALmRNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步评价
摘要：NGAL是一种涉及肾脏损伤的生物标志物，其mRNA在肾脏组织中高表达，可以被用于早期肾损伤的检测。本研究建立了NGALmRNA荧光定量PCR检测方法，并对其进行了初步评价，结果证明该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以作为一种可行的早期肾损伤检测方法。
关键词：NGALmRNA；荧光定量PCR；肾损伤；生物标志物；特异性；灵敏度；检测方法
一、引言
肾脏是人体中的重要器官之一，其主要功能是清除体内产生的代谢废物和维持电解质和水平衡。但是，由于各种原因，肾脏可能受到损伤，导致其功能受损，严重者可能会导致肾功能衰竭。因此，肾损伤的早期检测和诊断对于预防肾脏疾病的发生和发展具有重要意义。
近年来，随着生物技术的不断发展，越来越多的生物标志物被用于肾损伤的早期检测和诊断。其中，NGAL（neutrophilgelatinase-associatedlipocalin）作为一种重要的生物标志物被广泛研究。NGAL在肾脏组织中高表达，并且在肾损伤的早期阶段就会增加，因此可以作为肾损伤的早期指标。
为了更准确地检测NGAL，我们建立了NGALmRNA荧光定量PCR检测方法，并对其进行了初步评价。本文将对该方法的建立及初步评价进行详细介绍。
二、材料和方法
2.1实验材料
（1）老鼠肾脏组织样本（健康组）
（2）老鼠肾脏组织样本（损伤组）
（3）TRIzol试剂
（4）cDNA合成试剂盒
（5）SYBRGreenPCRMasterMix
（6）PCR仪
2.2实验方法
（1）组织处理和RNA提取
将老鼠的肾脏组织分别采集，分别放置于2ml离心管中，并加入1ml的TRIzol试剂，完全研磨后，离心24800×g，将上清液转移到新的离心管中，加入2-3倍体积的冷乙醇沉淀RNA，并用DEPC水溶解RNA。
（2）cDNA合成
根据试剂盒说明书，利用cDNA反转录试剂盒将RNA转录成cDNA。反应条件为42℃，1h。
（3）荧光定量PCR反应
PCR反应采用SYBRGreenI染料荧光探针法，PCR反应条件为：93℃2min，93℃15s，56℃30s，72℃20s，共40个循环。
（4）数据处理
测定NGALmRNA的相对表达量，并对其进行统计学分析。
三、结果
3.1NGALmRNA的表达情况
通过NGALmRNA荧光定量PCR检测，我们确定了该方法中NGALmRNA的表达情况。结果显示，在健康组和损伤组中，NGALmRNA的表达均有所差异。
3.2NGALmRNA相对表达量
我们通过荧光定量PCR测定了NGALmRNA的相对表达量，并用健康组作为对照组进行统计学分析。结果表明，损伤组的NGALmRNA相对表达量显著高于健康组，差异具有统计学意义。
四、讨论
NGAL作为肾脏损伤的生物标志物，可以在早期阶段检测肾损伤的发生。因此，对NGAL的准确检测具有重要意义。我们通过NGALmRNA荧光定量PCR检测方法，成功检测了NGALmRNA的表达情况，并确定了NGALmRNA的相对表达量。该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以较为准确地检测NGAL。
总之，本研究建立了一种可行的NGALmRNA荧光定量PCR检测方法，并对其进行了初步评价，证明该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以作为一种可行的早期肾损伤检测方法。