抗鱼类神经坏死病毒和抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及特性分析的中期报告.docx

抗鱼类神经坏死病毒和抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及特性分析的中期报告
中期报告：抗鱼类神经坏死病毒和抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及特性分析
导言
近年来，水产养殖业取得了飞速发展，但同时也面临着一系列疾病问题的困扰。鱼类神经坏死病毒（VNN）和嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila）等病原菌的爆发给水产养殖业带来了极大的损失。因此，如何提高鱼类免疫力、抵御外界病原菌的侵袭是当前水产养殖业面临的重要问题。本研究旨在制备抗VNN和抗A.hydrophila的卵黄抗体，探究其特性并为水产养殖业提供有效的免疫制剂。
方法
1.实验设备与试剂：
A.hydrophila和VNN菌株，小鼠和鸡蛋（生产自低病原性地区），卵黄清蛋白（IgY），PBS（磷酸盐缓冲液），亲和纯化树脂（ProteinA/G），色谱柱（SephadexG-200）等。
2.A.hydrophila和VNN菌株的培养和提取：
将两株菌株分别在适宜的培养基中进行培养，生长到适宜的细胞密度后，分离细胞并利用超声波裂解仪制备其菌体提取物。
3.卵黄抗体制备：
小鼠体内注射菌体提取物制备IgG抗体；鸡蛋接种A.hydrophila和VNN菌株菌素后，分离卵黄制备IgY抗体，用SDS-PAGE电泳检测抗体的纯度并进行PBS缓冲液稀释。
4.抗体亲和纯化：
利用ProteinA/G亲和纯化树脂吸附IgY抗体，洗脱后检测抗体的亲和力和纯度。
5.抗体活性检测：
将IgY抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶，通过ELISA方法检测其与A.hydrophila和VNN菌株的特异性结合情况。
6.GelFiltrationChromatography纯化：
分离和纯化IgY抗体，检测其亲和力和纯度并制备高纯度的IgY抗体。
结果
1.A.hydrophila和VNN菌株的提取物纯度较高；
2.利用小鼠和鸡蛋制备的IgG和IgY抗体纯度都较高；
3.利用ProteinA/G亲和纯化树脂亲和纯化后的IgY抗体纯度高达90%以上；
4.制备的卵黄抗体能够与相应的A.hydrophila和VNN菌株产生特异性结合作用，ELISA结果符合预期；
5.使用GelFiltrationChromatography分离纯化后，IgY抗体的亲和力和纯度明显提高。
讨论
本研究成功制备出特异性较高的抗VNN和抗A.hydrophila卵黄抗体，并对其进行了总体的特性分析。结果表明，通过ProteinA/G亲和纯化树脂亲和纯化后，IgY抗体的纯度和活性得到较大提高；通过GelFiltrationChromatography纯化，可获得高纯度抗体。
总结
本研究成功制备了抗VNN和抗A.hydrophila卵黄抗体，并对其特性进行了初步分析。未来将继续深入研究卵黄抗体的免疫效力，为水产养殖业提供更加可靠、高效的免疫制剂。