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鸭肠炎病毒囊膜蛋白Gb和gC主要抗原域的原核表达和单克隆抗体的研制
引言
鸭肠炎病毒（Duckenteritisvirus,DEV）是一种DNA病毒，属于病毒家族Herpesviridae和属Alphaherpesvirinae，是鸭、鹅等家禽的重要病原体之一。病毒在感染后，会引起禽类的多种疾病，如上呼吸道感染、消化道病变、神经系统症状及全身性病变等。幸运的是，雏鸭和成年鸭的免疫系统对鸭肠炎病毒有较强的免疫力，因此DEV的防控工作主要是在雏鸭出壳后的疫苗接种阶段。
DEV的囊膜蛋白Gb和gC是该病毒的两个主要抗原，在病毒的攻击过程中起着非常重要的作用。本论文旨在介绍这两个蛋白的结构、功能及免疫学特性，以及囊膜蛋白Gb和gC的原核表达和单克隆抗体的研制。
一、鸭肠炎病毒的囊膜蛋白Gb和gC
囊膜蛋白Gb和gC是DEV病毒囊膜蛋白的两种主要组成部分。在病毒的感染过程中，它们起着非常重要的作用。
1.囊膜蛋白Gb
囊膜蛋白Gb是病毒囊膜上的一种糖蛋白，其分子量为69kDa。它是Alphaherpesvirinae亚科病毒的一种保守性糖蛋白。Gb的N末端为糖蛋白，其中约70%为糖基化的N-乙酰甲氧基胺基酸（N-acetyl-methoxy-amino-acid，NAM），其余为O-糖基化的NAM或N-糖基化的谷氨酸（glutamine，Q）。Gb的C末端为疏水区，其序列为能与病毒囊膜透明带的脂质成分结合的去除序列。
2.囊膜蛋白gC
囊膜蛋白gC是一种高度可变的糖蛋白，其分子量为107kDa。它是DEV的囊膜上的另一种重要成分。gC可以与病毒囊膜上的囊膜蛋白gB共同作用，以开展对宿主细胞的入侵过程。
二、囊膜蛋白Gb和gC的原核表达
1.Gb和gC的原核表达系统
原核表达系统（prokaryoticexpressionsystem）是一种常见的表达外源蛋白的方法，主要适用于无法使用真核表达系统的蛋白或蛋白小分子重复结构的蛋白。目前，原核表达系统主要包括革兰氏阴性菌（Escherichiacoli）和革兰氏阳性菌两种原核菌种。
在革兰氏阴性菌中，编码目标蛋白的质粒通常包含促进转录和翻译的启动子、信使RNA和终止序列。而在革兰氏阳性菌中，目标蛋白往往被合成并分泌到细胞外，这是由于革兰氏阳性菌细胞壁的结构特点，使其具有选择性分泌蛋白的能力。
在Gb和gC的原核表达中，主要使用的是革兰氏阴性菌系统。原因在于这两个蛋白需要特定的糖基化，而革兰氏阳性菌不能实现这一过程。
2.Gb和gC的表达纯化
在革兰氏阴性菌中表达并纯化Gb和gC可以通过多种途径实现。其中，最常见的方法是利用融合蛋白系统将目标蛋白与标签蛋白（如His标签、GST标签等）连接起来以方便表达纯化。此外，还可以在目标蛋白中引入多角色质体序列，提高其抗原性或稳定性。
三、单克隆抗体的研制
单克隆抗体是目前广泛应用于生物学和医学研究领域的一种高效工具，它能高特异地识别蛋白质分子，并广泛应用于ELISA、Westernblotting、免疫组化等多项实验检测中。
单克隆抗体的制备过程通常包括免疫原选择、小鼠或兔子免疫、脾细胞分离和融合、杂交瘤筛选及鉴定、单克隆抗体的培养和纯化等步骤。
针对Gb和gC的单克隆抗体研制虽然已经取得了一定进展，但仍存在许多亟待解决的问题。例如：目前尚未建立一种完善的Gb和gC的抗原四化方法，免疫原的选择不确定性会导致抗体的特异性和亲和力无法得到保证，这也是制约单克隆抗体研制的主要原因之一。
结论
鸭肠炎病毒的囊膜蛋白Gb和gC是该病毒的重要抗原，对于DEV感染的防治具有重要的意义。目前，采用原核表达系统进行Gb和gC的表达纯化，为后续的单克隆抗体研制提供了便利。但由于目前技术的局限性，单克隆抗体的研制还需要进一步完善和提高。希望通过本文的介绍，对于鸭肠炎病毒的防治工作和抗体开发有所启示。