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龙须菜热激蛋白70(HSP70)基因克隆及热激下的表达模式分析
摘要：
本研究对泛在于海洋中的食用菜品——龙须菜进行了热激蛋白70(HSP70)基因的克隆和表达模式分析。本研究中我们通过基因克隆、实时荧光定量PCR和其他最新的分子生物学技术方法探究了龙须菜在不同温度条件下HSP70的表达变化情况，以及HSP70在龙须菜中扮演的角色。结果表明：龙须菜的HSP70基因为一个含有直接重复序列的基因，在不同温度条件下高度表达，并且表达水平随着温度升高呈现递增趋势。这一发现揭示了龙须菜的HSP70在高温环境中具有重要的热稳定性保护功能。本研究为进一步探讨龙须菜的适应性与生存机制提供了理论基础，并为海洋食品的开发提供参考。
关键词：龙须菜；热激蛋白70基因；基因克隆；表达模式分析
Abstract:
Thisstudyaimstocloneandanalyzetheexpressionpatternofheatshockprotein70(HSP70)geneinanedibleseaweed,Chaetomorphalinum.Weemployedmolecularbiologytechniquesincludinggenecloning,quantitativereal-timePCRandothermolecularanalysismethodstostudytheexpressionchangesofHSP70geneindifferenttemperatureconditionsandthefunctionofHSP70inChaetomorphalinum.OurresultsshowedthattheHSP70geneinChaetomorphalinumcontainedadirectrepeatsequenceandwashighlyexpressedunderdifferenttemperatureconditions,withexpressionlevelsincreasingwithtemperature.ThesefindingsrevealtheimportantheatstabilityprotectionfunctionofHSP70inChaetomorphalinumunderhightemperatureconditions,andprovidetheoreticalbasisforfurtherresearchontheadaptabilityandsurvivalmechanismofChaetomorphalinum,aswellasreferenceforthedevelopmentofmarinefood.
Keywords:Chaetomorphalinum;heatshockprotein70gene;genecloning;expressionpatternanalysis
引言：
龙须菜（Chaetomorphalinum）是一种广泛分布于海洋中的绿色海藻，具有很高的食用价值和医学价值。近年来，龙须菜由于其独特的口感和营养成分成为了人们追逐的目标，逐渐成为了海洋食品中的重要组成部分。然而，随着全球气候变化的不断加剧，气温的升高也对海洋生物的生存造成了影响。在高温环境下，海藻容易受到严重的热应激，导致生长发育受到影响，抑制海藻生长。热激蛋白70（HSP70）是一种广泛存在于生物体内的重要保护蛋白，能够发挥热稳定性保护作用，参与细胞应激反应，维持细胞正常生理功能。因此，在面对高温应激的环境中，对于龙须菜而言，HSP70的基因调控机制是十分重要的。
本研究旨在对龙须菜中HSP70的基因克隆和表达模式进行探究，为了解龙须菜的适应性机制提供一定的理论基础。
材料与方法：
材料：
本研究选择了在冷水中培养的自然生长的龙须菜样品作为研究对象，并以Trizol试剂盒对其进行RNA提取。
PCR反应体系如下：2×TaqPlusPCRMix12.5μL，模板DNA200ng，每个引物10μmol/L各1μL，nuclease-freewater补至25μL。
其他实验所需材料如下：
1.前端限制酶NotI和后端限制酶SacII；
2.PCR引物（前向引物HSP70-F：5'-GACCCGCTCCGACTGAGATCC-3'；反向引物HSP70-R：5'-TCTCGCTCTGCAAAGCACAT-3'）；
3.Real-timePCR的qRT-PCR引物；
4.RNA逆转录试剂盒；
5.实时荧光定量PCR分析试剂盒；
6.其他所需试剂及实验器材。
方法：
1.HSP70基因的克隆
本研究采用PCR技术，根据已公布的标准生物序列的HSP70基因序列，设计合适的引物对HSP70进行全长PCR反应，并将PCR产