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鸭源呼肠孤病毒致BHK-21细胞凋亡的研究
摘要：
本文主要研究了鸭源呼肠孤病毒对BHK-21细胞的影响。通过细胞培养、MTT法和细胞凋亡检测等方法，研究了病毒感染后对细胞存活率、形态和凋亡率的影响。结果表明，鸭源呼肠孤病毒感染能够显著降低BHK-21细胞的存活率，并且造成细胞形态的改变。此外，还发现病毒感染能够诱导细胞凋亡，表现为DNA断裂、细胞核团聚和形态变化。综上所述，该研究为深入理解鸭源呼肠孤病毒感染机制和探索有效的治疗手段提供了一定的理论依据。
关键词：鸭源呼肠孤病毒；BHK-21细胞；细胞凋亡；MTT法；DNA断裂
正文：
I.引言
鸭源呼肠孤病毒(DuckhepatitisAvirus,DHAV)是一种属于呼肠孤病毒科(Apicomplexa)的病毒，是鸭的重要病原体之一。DHAV常常引起鸭的呼吸道和肠道疾病，导致鸭的生产力下降和死亡率的增加。目前，为了控制DHAV的传播和治疗鸭感染病毒的疾病，人们对DHAV的生物学特性和感染机制进行了广泛的研究。
BHK-21细胞是一种原代成纤维细胞，常用于进行病毒感染的模型研究。本文主要研究了DHAV对BHK-21细胞的影响，旨在深入理解DHAV感染机制和探索有效的治疗手段。
II.材料和方法
A.实验材料
本实验使用的细胞系为BHK-21细胞，DHAV为某鸭群体中分离并鉴定的DHAV-HX病毒株。
B.细胞培养
BHK-21细胞株在37°C下、5%CO2条件下，以Dulbecco改良的MEM（DMEM）基本培养液，含10%热灭的胎牛血清（FBS）进行培养。
C.病毒滴度测定
用细胞培养滴法（TCID50）法，测定DHAV病毒的滴度。
D.细胞增殖率的测定
用MTT法，测定DHAV感染后BHK-21细胞的增殖活力。
E.细胞凋亡的检测
通过流式细胞仪和DNAladdering法，检测DHAV感染后BHK-21细胞的凋亡情况。
III.实验结果
A.DHAV感染后BHK-21细胞的存活率变化
将BHK-21细胞接种DHAV病毒液之后，不同时间内测定BHK-21细胞的生存率。结果表明，DHAV感染后，BHK-21细胞的生存率随着感染时间的增长而逐渐下降。特别是在感染48小时后，最低存活率仅剩下7.4%。
B.DHAV感染后BHK-21细胞的形态观察
将BHK-21细胞接种DHAV病毒液之后，用显微镜观察细胞形态。结果表明，BHK-21细胞在病毒感染后出现了明显的形态改变。由原来的单一、长条状变为不规则、短小，部分细胞出现了圆形、浑浊、龟裂等症状。
C.DHAV感染后BHK-21细胞的凋亡率变化
通过DNAladdering法检测BHK-21细胞的DNA裂解情况，确定细胞是否发生凋亡。结果表明，DHAV感染后，BHK-21细胞出现了明显的DNA断裂，且时间越长，越容易出现DNA断裂现象。此外，在检测细胞凋亡率时，流式细胞仪的数据也显示了同样的趋势。随着时间的增长，BHK-21细胞的凋亡率逐渐增加，其中在感染48小时后，凋亡率最高（24.5%）。
IV.讨论
本研究证明了DHAV能够对BHK-21细胞产生显著的影响。在感染48小时后，细胞存活率骤降至7.4%。观察细胞形态可以发现，病毒感染对细胞形态造成了明显的改变，包括不规则、短小、圆形、浑浊、龟裂等症状。进一步检测发现，病毒感染能够诱导BHK-21细胞凋亡，表现为DNA断裂、细胞核团聚和形态变化。
细胞凋亡是一种自身自我毁灭的程序性死亡方式，是针对受到损伤或感染、异常增生的细胞进行的一种正常生理过程。然而在某些情况下，细胞凋亡也可能会对组织器官或个体产生负面影响。因此，了解DHAV感染对宿主细胞凋亡的影响，有利于解析DHAV的致病机理以及提出有效的治疗策略。
V.结论
本研究表明，DHAV感染对BHK-21细胞存活率和形态造成了明显的影响，并且能够诱导BHK-21细胞凋亡。这些结果揭示出DHAV致病机制中的一些关键环节，为研究DHAV的感染机制和寻找有效的治疗方法提供了一定的理论依据。