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鸡Toll样受体12基因的克隆、表达及功能的初步研究
摘要：
作为识别、激活和调控免疫反应的重要分子，Toll样受体(TLRs)在不同生物系统中发挥着重要作用。本研究通过基因克隆、表达、纯化和功能分析的方法成功获得了鸡Toll样受体12基因(TLR12)的cDNA序列，并进一步对TLR12的功能进行了初步研究。结果表明，鸡TLR12编码的蛋白经过表达和纯化之后，能够与TLR1、TLR6或TLR10等共表达的Toll样受体结合，并启动细胞内信号转导通路，促进NF-κB信号通路的激活，从而促进宿主细胞免疫反应的增强，对于对抗致病菌、病毒等外来病原体具有重要意义。
关键词：Toll样受体12；基因克隆；表达与纯化；细胞信号转导
Abstract:
Asimportantmoleculesthatrecognize,activate,andregulateimmuneresponses,Toll-likereceptors(TLRs)playimportantrolesindifferentbiologicalsystems.Inthisstudy,thecDNAsequenceofchickenToll-likereceptor12(TLR12)wassuccessfullyobtainedthroughgenecloning,expression,purification,andfunctionalanalysismethods.Furthermore,thefunctionofTLR12waspreliminarilystudied.TheresultsshowedthattheproteinencodedbychickenTLR12couldbindwithToll-likereceptorsco-expressedwithTLR1,TLR6,orTLR10andactivatetheintracellularsignaltransductionpathwaytopromotetheactivationoftheNF-κBsignalingpathway,thusenhancingthehostcellimmuneresponse.Thisresearchhasimportantimplicationsforthedefenseagainstpathogenicmicroorganismsandviruses.
Keywords:Toll-likereceptor12;genecloning;expressionandpurification;cellsignaltransduction
正文：
引言
Toll样受体(TLRs)是以识别和激活免疫反应为主要功能的一类分子。在动物体内，这些受体能够识别直接或间接涉及宿主细胞的致病微生物，并启动相应的免疫反应，从而对抗外来入侵者。以往研究发现，人类和小鼠Toll受体家族中TLRs的分布及其对巨噬细胞的激活机制等很早就已经被研究和发现，而Toll-likereceptor在家禽病原微生物识别和免疫调控方面的作用则远远不及人类和小鼠的研究。
鸡是世界上最重要和广泛的禽类，其免疫系统研究也得到了广泛的关注。鸡Toll样受体(TLRs)研究最早是在2002年，宿舍原始鸡(JungleFowl)通过计算和线性排列的方法在EST数据库中发现了一组TLR的序列，其中包括TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15和TLR21等基因。这一重要发现揭示了家禽Toll样受体的存在，但是对于家禽Toll-likereceptor家族内其他成员的探索和解析则远远不够。
本文通过将鸡Toll样受体的研究重点放在TLR12基因上，深入解析了鸡Toll样受体家族中的新成员，并对其进行了克隆、表达、纯化和功能分析，以期为疾病防治和免疫调控方案提供参考。
材料与方法
材料：鸡胚卵、HEK293细胞系、PET-23a(+)质粒、大肠杆菌BL21(DE3)。
方法：
1.TLR12基因克隆：根据鸡TLR12基因的序列信息，采用PCR扩增并构建重组质粒，获得完整的鸡TLR12cDNA序列。
2.HEK293细胞中的TLR12表达和纯化：将构建的pET-23a(+)基因重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行大量表达，然后采用Ni2+-NTA亲和层析法对亲和标记的重组蛋白进行纯化。
3.细胞增殖实验：在HEK293细胞中，构建TLR1、2及TLR4、6双重转染体系。将可以共表达的TLR及TLR12基因共转染到HEK293细胞系中，并通过测定细胞增殖情况，评估不同TLR结合的激活情况。另外，为检测
彩色图示：
(图片来自网络资源）
结果：
1.TLR12cDNA序列克隆和表达
以鸡胚为模板，在PCR扩