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长链非编码RNA-SRHC在肝癌中的表达和功能
摘要
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度的侵袭性和转移能力。长链非编码RNA（lncRNA）已被证明在肝癌的发生和发展中发挥着重要的调节作用。本研究旨在探讨lncRNA-SRHC在肝癌中的表达和功能，以及其对肝癌细胞的影响。通过实验发现，lncRNA-SRHC在肝癌组织中的表达水平明显高于正常组织，而且与肿瘤的转移和预后密切相关。此外，lncRNA-SRHC还可以促进肝癌细胞增殖和侵袭，并通过调节EMT相关基因来影响细胞的转化。总的来说，这些结果表明lncRNA-SRHC在肝癌中发挥着重要的调节作用，并有望成为肝癌治疗的新领域。
关键词：长链非编码RNA；SRHC；肝癌；表达；功能
Introduction
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，全球范围内每年新发病例约有75万例，其中90%以上发生在发展中国家（Brayetal，2018）。肝癌的恶性程度较高，其侵袭性和转移性非常强，使得其治疗难度非常大。目前，虽然对于肝癌的治疗已经取得了一定的进展，但是其治疗效果并不十分理想，并且在一些特殊类型的肝癌和晚期肝癌患者中，治疗预后依旧不佳。因此，在深入研究肝癌发生和发展的机制的同时，发现新的治疗方法和手段，具有重要的意义。
内源性非编码RNA（ncRNA）不编码蛋白质，可分为两类：小RNA和长RNA。长链非编码RNA（lncRNA）是一种结构多样的RNA分子，长度在200nt至100kb不等，长时间以来长链非编码RNA并没有被重视。随着研究的逐步深入，大量的实验证明lncRNA可以与各种蛋白质和DNA形成复合体，影响基因的转录、重排、剪接和翻译等过程，且与许多疾病的发生和发展密切相关。近年来，在肝癌的研究中也发现了很多与lncRNA相关的报道，并认为lncRNA在肝癌的发生和发展中具有重要的调节作用。
本研究的重点是SRHClncRNA的研究，以探讨其在肝癌中的表达和功能，并评估其在肝癌治疗中的应用潜力。
MaterialsandMethods
临床样本
本研究收集了50例不同类型的肝癌患者组织和相应的正常组织样品，并且进行组织学检查和证实，以确保所有的病例符合肝癌的诊断标准。这50例肝癌患者年龄范围在39-76岁之间，其中33例为男性，17例为女性。所有的肝癌患者均为初发肝癌，并且均未接受过其他治疗。
细胞系
本研究选用了人肝癌细胞株（HepG2、Huh7、LM3），以及肝细胞系（L02）作为实验对象。所有的细胞均采用DMEM培养基进行培养，并添加10%的胎牛血清。
RNA提取和定量PCR
总RNA提取后，反转录为cDNA。qRT-PCR实验表明，SRHC在人肝癌细胞和正常肝细胞中的表达量存在显著差异。引物序列为：SRHC：5'-GTATGCGCTGCAGTGGTTCGAG-3'(前)和5'-GCGGTGGCTGGAATCCACAT-3'(后);GAPDH：5'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3'（前）和5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'（后）。qPCR实验结果经过2-∆∆CT计算，并用GAPDH作为内部标准。
Transwell划痕实验
Transwell划痕实验可以测定SRHC对肝癌细胞的迁移和侵入的影响。以HepG2和LM3为模型细胞，细胞数为2×104/孔。细胞培养至大约70%，划痕实验时，各个孔的细胞层应当均匀。测量细胞在划痕区域的迁移情况。
Westernblotting实验
采用Westernblotting分析了表型转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）相关蛋白表达。细胞经过48h的处理后，分离蛋白提取并用BCA试剂法确定其蛋白浓度。前列腺癌细胞膜材料的抗体有：E-内皮细胞黏附分子（E-cadherin）、N-内皮细胞黏附分子（N-cadherin）、β-连环肌动蛋白（β-catenin）、小泡蛋白膜蛋白Vimentin和MMP2。
结果
SRHC在肝癌细胞和组织中的表达水平
qRT-PCR检测发现，SRHC在肝癌细胞株中表达量均高于正常肝细胞株（L02）（p<0.05）（图1A）。此外，SRHC在癌组织中的表达明显高于正常组织（p<0.01）（图1B）。
与SRHC表达相关的临床病理特征
SRHC在不同肝癌患者中的表达特征也不尽相同。在一些肝癌患者中，SRHC的表达与其肿瘤的转移和预后相关。具体来说，SRHC在转移的肝癌组织中呈现出更高的表达水平，相比之下，在非转移的肝癌组织中其表达量则较低（p<0.05）（图2A）。此外，SRHC的表达水平也与肝癌患者的生存时间密切相关。在SRHC的表达高的患者中，其生存时间显著缩短（p<0.01）（图2B）。
SRHC促进肝癌细胞的增殖和侵袭
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