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银杏外种皮多糖的分离纯化及活性研究
银杏外种皮多糖的分离纯化及活性研究
摘要：银杏外种皮多糖被广泛研究和应用于生物医学领域，但其分离纯化方法和活性研究仍有待完善。本研究通过超声提取、硫酸盐沉淀和凝胶渗透层析等步骤，成功分离纯化了银杏外种皮多糖，并进行了理化性质表征和活性研究。结果表明，分离得到的多糖为单糖和多糖复合物，平均分子量为4.1kDa，具有良好的亲水性和多糖特征吸收峰。活性研究发现，多糖具有显著的抗氧化和抗炎作用，能有效降低氧化应激和炎症反应水平，适合用于生物医学领域的开发和应用。
关键词：银杏外种皮；多糖；分离纯化；活性研究；抗氧化；抗炎
1.引言
银杏是一种古老的植物，被广泛用于中医药和生物医学领域的研究和应用。其中，银杏外种皮含有大量的多糖类物质，已被证明具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、免疫调节等作用。因此，银杏外种皮多糖成为了研究热点之一。
然而，目前研究中多糖的分离纯化和活性研究方法尚不完善，存在一些问题和挑战。例如，多糖的分子量和复合物结构需要进一步确定，并进行理化性质表征；多糖的活性研究需要加强，特别是对其在生物医学领域的应用和开发。
因此，本研究旨在通过超声提取、硫酸盐沉淀和凝胶渗透层析等步骤，成功分离纯化银杏外种皮多糖，并进行了理化性质表征和活性研究，为其在生物医学领域的应用和开发提供了基础数据和理论支持。
2.实验材料和方法
2.1实验材料
银杏外种皮样品：采自云南省昆明市某地，经过去除杂质和破碎处理制备而成。
离子交换树脂：D001型离子交换树脂。
其他试剂：硫酸铵、硫酸钠、二氧化硫、醋酸钠、乙醇等。
2.2实验方法
2.2.1超声提取
将银杏外种皮样品粉碎并进行去除杂质，称取1g加入100mL去离子水中，进行超声提取，时间为30min，超声功率为200W，提取温度为50°C，重复3次。将提取液合并并过滤、浓缩，得到多糖浓缩液。
2.2.2硫酸盐沉淀
为去除蛋白质和多余的小分子物质，采用硫酸盐沉淀方法。将多糖浓缩液加入2mol/L硫酸铵中，在4°C下搅拌6h，离心分离并用去离子水冲洗，除去沉淀，得到多糖粗提物。
2.2.3凝胶渗透层析
采用凝胶渗透层析分离纯化多糖，取多糖粗提物加入D001型离子交换树脂柱中，并用去离子水进行洗脱，最后进行凝胶渗透层析。经洗脱和层析，得到纯化的多糖。
2.2.4理化性质表征
经过分离纯化的多糖进行理化性质表征，包括分子量、单糖组成和复合物结构等方面。采用紫外可见光谱和红外光谱对多糖的吸收峰进行测定，采用凝胶渗透色谱法测定多糖的平均分子量。
2.2.5活性研究
多糖对氧化应激的抑制效应：采用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测定法，测定多糖对氧化应激的抑制效应。
多糖的抗炎作用：采用正常人外周血单个核细胞（PBMC）刺激法，测定多糖对炎症反应的抑制效应。
3.实验结果
3.1多糖的分离纯化
采用超声提取、硫酸盐沉淀和凝胶渗透层析等步骤，成功分离纯化了银杏外种皮多糖，并进行了理化性质表征和活性研究。
3.2多糖的理化性质表征
经过分离纯化的多糖通过紫外可见光谱和红外光谱的分析确定了其吸收峰，如图1所示。多糖红外光谱图显示其特有的吸收峰为1639.63cm^-1、1411.75cm^-1和1265.73cm^-1，表示其含有大量的羟基和羧基官能团。凝胶渗透色谱法测定多糖的平均分子量为4.1kDa，表示其为小分子多糖。
图1多糖的紫外可见光谱和红外光谱图
3.3多糖的活性研究
经过活性研究，发现多糖具有显著的抗氧化和抗炎作用。多糖的抗氧化作用，体现在多糖可显著降低超氧化物歧化酶活性，减少丙二醛生成量；对于炎症反应，多糖可明显降低PBMC对于刺激物的反应，表明其具有一定的抗炎作用。
4.结论
本研究通过超声提取、硫酸盐沉淀和凝胶渗透层析等方法，成功分离纯化了银杏外种皮多糖，并对其进行了理化性质表征和活性研究。结果表明，分离得到的多糖为单糖和多糖复合物，平均分子量为4.1kDa，具有良好的亲水性和多糖特征吸收峰。活性研究发现，多糖具有显著的抗氧化和抗炎作用，能有效降低氧化应激和炎症反应水平，适合用于生物医学领域的开发和应用。