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聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的制备及其细胞相容性研究
随着人类寿命的延长和自然环境的破坏，骨科疾病的发病率也在不断上升。因此，寻找一种能够快速有效地修复骨缺损的材料成为了当代医学研究的热点之一。近年来，聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜成为了一种备受关注的材料。该材料具有优异的生物学性能和机械性能，能够在创伤部位引导骨再生，为骨科治疗提供了新的发展方向。
一、聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的制备
聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的制备主要分为以下三个步骤：
1、制备聚乳酸纳米羟基磷灰石复合材料薄膜
首先，将纳米羟基磷灰石(Nano-HA)与聚乳酸(PLA)在乙醇中混合，制备成纳米羟基磷灰石/聚乳酸复合材料溶液。然后将溶液均匀地涂覆在旋涂玻璃上，在真空条件下烘干后制备成PLA/Nano-HA复合材料薄膜。
2、蛋白质涂层
将丝素蛋白(SF)在乙酸溶液中溶解，然后加入少量的无水甲醇，同时加入适量的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)卡巴胺盐酸盐(ECDI·HCl)，搅拌、振荡后制备成丝素蛋白活化溶液。将已制备的PLA/Nano-HA复合材料薄膜浸泡在丝素蛋白活化溶液中，再在室温下静置24小时，便可制备成SF涂层。
3、交联处理
将制备好的薄膜放入含有1.5%的葡萄糖和0.1%的乳酸溶液中，进行交联处理。交联后的聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜即制备完成。
二、聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的细胞相容性研究
1、细胞培养
本实验采用人体成骨细胞(hFOB1.19)进行细胞培养。细胞在37℃、5%CO2的条件下培养，并使用Dulbecco'smodifiedeaglemedium(DMEM)和10%FetalBovineSerum(FBS)作为培养基。
2、材料的细胞毒性测试
本实验采用MTT法检测聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的细胞毒性。将制备好的薄膜装入Φ24孔板中，先加入200μL的FBS，并在不接触FBS的情况下，将细胞悬液加入到不同孔中。接种后，孔板放于细胞培养箱中培养24小时，然后加入MTT溶液，再次培养4小时。最后抽掉培养液并加入DMSO，振荡破碎细胞，让细胞产生出紫色的形成物。用多功能酶标仪检测吸光度。
3、细胞黏附观察
采用荧光显微镜观察聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的细胞黏附情况。将制备好的薄膜切成1cm2大小的薄片，分别放入Φ24孔板中，加入200μL的细胞悬液，放置于细胞培养箱中培养。接种后，将孔板取出并漂洗去除未附着的细胞。将薄膜取出，用PBS进行漂洗，用荧光显微镜观察细胞的黏附情况。
实验结果表明，聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜制备简单，细胞相容性良好。制备的聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜能够良好地支持人体成骨细胞的黏附和生长，有望开发成一种优秀的骨修复材料。
综上所述，聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜具有较为理想的制备过程和细胞相容性，能够在创伤部位引导骨再生。但是，这只是针对实验环境下的结果，实际应用过程中还需要针对各种人体因素进行研究，以提高治疗效果。未来，需进一步深入研究，提高聚乳酸纳米羟基磷灰石丝素蛋白引导骨再生膜的临床应用效果，更好地为医学治疗服务。