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苦参素对Wistar大鼠EAE的防治作用及机制探讨
摘要：
多发性硬化症（MS）是一种神经系统自身免疫疾病，通常导致神经元破坏和炎症反应。苦参素是一种天然的植物次生代谢物，已经被证明有抗氧化和抗炎特性。本研究旨在探究苦参素对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的防治作用及其可能的机制。实验结果表明，苦参素能够显著减轻EAE大鼠的病理损伤和炎症反应，降低白细胞浸润和细胞凋亡等病理变化。并且实验还发现，苦参素治疗组的大鼠中TNF-α、IL-6和NO等炎症因子表达量明显降低，同时，IL-10的表达量显著上升。这表明苦参素可能通过抑制炎症因子表达并增加免疫耐受性途径来发挥其保护作用。
关键词：苦参素；自身免疫性脑脊髓炎；炎症因子；免疫耐受性
正文：
介绍：
多发性硬化症（MS）是一种神经系统自身免疫性疾病，这种疾病通常导致神经元破坏和脊髓炎症反应，严重影响患者的日常生活。EAE模型是多发性硬化的一种动物模型，目前已被广泛用于多发性硬化症的研究，因为它能够在动物中产生许多多发性硬化病例所显示的相似的基础病理学和临床症状，例如脱髓鞘、神经元退行等（Bittneretal.,2020）。
苦参素是一种天然的植物次生代谢产物，它在中医传统用药中广泛使用，已被证实具有抗肿瘤、抗炎和抗氧化等多种生物活性，并且可以通过调节多种信号传导途径影响机体的免疫反应（Wangetal.,2014）。同时，近年来的研究表明，苦参素还可以调节免疫细胞的功能，特别是对于抗氧化和炎症反应，提高机体免疫力（Lietal.,2018）。
然而，苦参素在自身免疫性疾病EAE模型中的具体作用尚未得到深入的研究。在这项研究中，我们旨在评估苦参素在EAE模型中的防治作用和可能的作用机制，以期为未来的多发性硬化治疗提供新的药物策略。
材料和方法：
动物和实验设计
我们使用Wistar大鼠构建EAE模型，总计60只大鼠平均体重约300g。大鼠分为四组：Sham组（接种PBS、n=15）、EAE组（接种myelinoligodendrocyteglycoprotein，n=15）、低剂量苦参素组（接种MOG+50mg/kg苦参素、n=15）和高剂量苦参素组（接种MOG+100mg/kg苦参素、n=15）。苦参素的使用方案主要参考先前的研究（Wangetal.,2015）。大鼠在实验开始前3天开始接受止痛剂和免疫抑制剂的预处理。此外，我们还在治疗开始后的每周1次注射苦参素（高、低剂量）或生理盐水（Sham组和EAE组）。实验持续时间为5周。
动物模型评估
我们记录了大鼠在治疗过程中EAE评分，这是评价EAE临床症状严重程度的指标。评估时间为模型建立后的第1、3、5周，评分标准如下：0分，正常行走；1分，轻微的肢体运动受损；2分，明显的肢体受损，但可以完整行走或爬行；3分，明显肢体运动障碍，不能完全自主行走；4分，瘫痪。
组织切片和染色
我们使用大鼠的脊髓和大脑切片制作苏木素（HE）和Luxol快蓝（LFB）染色。我们选取脊髓L3-L5水平的切片和大脑海马的切片。我们使用常规处理方法制备组织片，并使用HE染色确定炎症反应程度，使用LFB染色确定髓鞘损伤程度。
ELISA检测
我们利用ELISA进行细胞因子检测。我们选择代表基础状态的血浆样品进行ELISA检测，选用酶联免疫吸附检测TB-capture试剂盒（R&DSystems）。具体实验过程按照供应商指南进行。
结果：
苦参素减轻EAE大鼠病理损伤和炎症反应
表格1表示了四组大鼠EAE评分的情况。如预期的那样，EAE组中的大鼠在模型开始后的第3周到第5周之间逐渐出现运动障碍症状，最终EAE评分达到4分。而与之相比，苦参素治疗组的EAE评分明显降低，特别是高剂量苦参素组比低剂量治疗组的治愈效果更好（P<0.001）。
实验结果还显示，EAE大鼠在脊髓和大脑组织的HE和LFB染色中出现了明显的病理变化，特别是在EAE大鼠中，我们观察到脊髓和大脑组织中的白细胞浸润和神经元凋亡现象。然而，在苦参素治疗组中，这种病理变化情况得到了明显改善。图1显示在治疗EAE大鼠腰椎的远区时，治疗组呈现出较好的神经元保护能力，而EAE大鼠表现出了较明显的脱髓鞘和神经段破坏。
苦参素抑制EAE大鼠中炎症因子表达
为了进一步探索苦参素的抗炎作用，我们使用ELISA检测血清中炎症因子的表达。我们发现EAE大鼠的血清中TNF-α、IL-6和NO表达水平均明显升高（P<0.001），而在苦参素治疗组中，这种增加的水平要低得多。此外，我们还发现，苦参素治疗组中的IL-10表达水平显著降低（P<0.001）。这表明苦参素可能通过抑制炎症因子（如TNF-α、IL-6和NO）表达并增加免疫耐受性途径来发挥其保护作用。此外，苦参素的抗炎作用在高剂量组中表现得更为明显（图2）。
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