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莱菔硫烷诱导人肝瘤HepG-2细胞G2M期阻滞及凋亡的机制研究
摘要：本实验旨在研究莱菔硫烷诱导人肝瘤HepG-2细胞G2M期阻滞及凋亡的机制。实验结果表明，莱菔硫烷可抑制HepG-2细胞增殖，并诱导G2M期细胞周期阻滞。同时，莱菔硫烷还能够促进凋亡相关蛋白的表达，如Bax、caspase-3等，以及抑制凋亡抑制相关蛋白Bcl-2的表达。本实验还研究了Wnt/β-catenin通路在莱菔硫烷诱导HepG-2细胞凋亡中的作用，结果表明莱菔硫烷可抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性，同时抑制β-catenin的核转移。综上，本实验揭示了莱菔硫烷诱导HepG-2细胞凋亡的分子机制，为临床治疗肝瘤提供了理论依据。
关键词：莱菔硫烷；HepG-2细胞；G2M期阻滞；凋亡；Wnt/β-catenin通路
Abstract:TheobjectiveofthisstudywastoinvestigatethemechanismofLuffarschwaefelinductionofG2MphasearrestandapoptosisinhumanlivercarcinomaHepG-2cells.TheresultsshowedthatLuffarschwaefelcouldsuppresstheproliferationofHepG-2cellsandinduceG2Mphasecellcyclearrest.Meanwhile,Luffarschwaefelcouldalsostimulatetheexpressionofapoptosis-relatedproteinssuchasBax,caspase-3,andinhibittheexpressionofapoptosisinhibitoryproteinBcl-2.ThisstudyalsoexaminedtheroleofWnt/β-cateninpathwayinLuffarschwaefel-inducedapoptosisofHepG-2cells.TheresultsshowedthatLuffarschwaefelcouldinhibittheactivityofWnt/β-cateninsignalingpathwayandinhibitthenucleartranslocationofβ-catenin.Insummary,thisstudyrevealedthemolecularmechanismofLuffarschwaefel-inducedapoptosisinHepG-2cells,providingatheoreticalbasisfortheclinicaltreatmentoflivercancer.
Keywords:Luffarschwaefel;HepG-2cells;G2Mphasearrest;apoptosis;Wnt/β-cateninpathway
1.引言
肝癌是一种致死性疾病，其治疗难度大、预后较差，目前尚未找到有效的治疗方法。因此，寻找新的肝癌治疗药物和研究其作用机制具有重要的现实意义。莱菔硫烷是从莱菔中提取的一种天然化合物，据报道具有抗肝癌的活性。本研究旨在探讨莱菔硫烷对肝癌细胞HepG-2的影响及其作用机制。
2.实验方法
2.1.细胞培养
本实验使用的HepG-2细胞系来源于中国科学院生物物理研究所。细胞在37°C、5%CO2的培养箱中培养，培养基为DMEM（含10%FBS）。
2.2.细胞增殖实验
采用MTT法检测莱菔硫烷对HepG-2细胞增殖的影响。
2.3.细胞周期和凋亡检测
细胞周期分布和凋亡情况的检测采用流式细胞术。
2.4.蛋白表达检测
Westernblot法检测与凋亡有关的蛋白的表达。
3.实验结果
3.1.莱菔硫烷抑制HepG-2细胞增殖
MTT实验结果显示，莱菔硫烷对HepG-2细胞的增殖具有明显的抑制作用，且呈现出浓度依赖性关系（图1）。
图1.莱菔硫烷对HepG-2细胞增殖的影响
3.2.莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G2M期阻滞
流式细胞实验显示，莱菔硫烷明显促进了HepG-2细胞的G2M期细胞周期阻滞（图2）。
图2.莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G2M期阻滞
3.3.莱菔硫烷诱导HepG-2细胞凋亡
流式细胞实验显示，莱菔硫烷可显著诱导HepG-2细胞凋亡，且呈现浓度依赖关系（图3）。
图3.莱菔硫烷诱导HepG-2细胞凋亡
3.4.莱菔硫烷抑制Wnt/β-catenin通路的活性
Westernblot结果显示，莱菔硫烷可显著抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性，同时抑制β-catenin的核转移（图4）。
图4.莱菔硫烷抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性
4.结论
本