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藏蒲公英多糖提取工艺及其纳米制剂的免疫试验初步研究
藏蒲公英（TaraxacummongolicumHand.-Mazz.），是蒲公英属植物中的一种，常见于我国北方草原地带。其全草、根及花具有抗菌、抗炎、降脂、降糖、保肝、解毒等多种药理作用。研究表明，藏蒲公英中含有多种活性成分，其中蒲公英多糖是一种重要的成分。
为了更好地利用藏蒲公英的多种药理作用，现已开展了多种提取藏蒲公英多糖的方法。本文主要介绍其中一种提取工艺及其纳米制剂的免疫试验初步研究。
一、藏蒲公英多糖的提取工艺
该实验的提取工艺采用超声波法。具体步骤如下：
1.收集并切碎藏蒲公英
2.用多倍体重的60℃的蒸馏水进行提取，浸泡4h。
3.经原液超声波破碎器（200W，30min）。
4.离心（3600rpm，20min），过滤（0.22μm膜）。
5.浓缩（真空温度恒定浴，60℃），加入应该量的乙醇，过夜沉淀。
6.离心（3600rpm，20min），洗涤。
7.再次浓缩至合适浓度即可。
经过提取得到的藏蒲公英多糖的红外光谱图如下：
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图1.藏蒲公英提取物的红外光谱图
从图中可以看到，藏蒲公英多糖中含有丰富的羟基（OH）基团和糖基（C-O-C）基团，这是多糖分子的典型结构。同时，图中的峰位变化也说明提取过程中结构发生了改变，主要是水合作用增强和分子链的断裂。
二、免疫试验的初步研究
为了研究藏蒲公英多糖对机体免疫系统的影响，我们用其制备了纳米粒子，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行了初步研究。具体步骤如下：
1.制备藏蒲公英多糖纳米粒子
将藏蒲公英多糖与海藻酸钠（SA）按1:2的质量比混合，加入少量无水乙醇中搅拌，加入适量的磷酸盐缓冲液（PBS）调节pH至7.4。
2.构建ELISA实验体系
将不同浓度的多糖纳米粒子在96孔板上打数量点，将其固定在板上。加入鸟类外周血清蛋白（BSA）阻断孔位，再加入不同浓度的抗藏蒲公英多糖抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，孵育30min。
3.测定吸光度（OD）值
用底物TMB进行染色，孵育制停以后测定各孔位的OD值，绘制标准曲线和检测样本的曲线。
结果分析：
通过实验，得到了藏蒲公英多糖纳米粒子的TEM图：
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图2.藏蒲公英多糖纳米粒子TEM图
图中展示了藏蒲公英多糖成功制备的纳米粒子，直径约为100nm左右。进一步的研究表明，这种纳米粒子不仅具有高效的稳定性和良好的可溶性特性，还具有良好的细胞相容性和低毒性。
在ELISA免疫实验中，我们得到了如下结果：
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图3.藏蒲公英多糖纳米粒子ELISA实验结果
图中展示了藏蒲公英多糖纳米粒子在不同浓度下的OD值和标准曲线的回归线，数据表明纳米粒子能够与抗藏蒲公英多糖抗体结合，提高检测灵敏度。
三、总结
通过以上实验的展示，我们可以得到如下结论：
1.超声波法提取藏蒲公英中的多糖，可以得到较高纯度的多糖组分。
2.利用藏蒲公英多糖制备的纳米粒子具有良好的稳定性、水溶性、细胞相容性和低毒性特点。
3.藏蒲公英多糖纳米粒子能够与抗多糖抗体结合，提高了检测的灵敏度。
因此，本研究为藏蒲公英多糖的开发利用提供了一种新思路和新方法，同时也为藏蒲公英的药用研究提供了一定的理论和实践基础。