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血管紧张素Ⅱ对新生大鼠心肌细胞内脂素表达的影响
血管紧张素II对新生大鼠心肌细胞内脂素表达的影响
摘要:
血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是一种重要的血管活性物质，在很多生理和病理过程中都发挥着重要作用。在心脏病理状态下，AngⅡ对脂素(leptin)、血红素氧合酶（HO）和肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）等因子的表达均有影响。本文研究了AngⅡ对新生大鼠心肌细胞内脂素表达的影响。通过体外培养新生大鼠心肌细胞，使用荧光光度计和实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测了细胞内脂素的表达水平，进一步明确了AngⅡ在心肌细胞内对脂素表达的影响。结果显示，AngⅡ可以显著促进心肌细胞中脂素mRNA的表达，同时也显著提高了细胞内脂素含量。
关键词:血管紧张素Ⅱ;新生大鼠心肌细胞;脂素
Introduction
心血管系统是人体最重要的生理系统之一，其功能正常与否直接影响人体健康。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是一种由肾素-血管紧张素系统(RAAS)产生的小肽类分子，具有强烈的血管收缩作用，能够影响心血管系统血压调节和水盐代谢等生理过程。而在心肌病理状态下，AngⅡ的过度分泌和过度作用往往会导致心肌细胞肥大、心肌重构和心血管疾病的发生和发展。
脂素(leptin)是一种由脂肪细胞分泌的激素，除了调节体脂肪储量和能量代谢，还参与了心血管系统的调节。此外，血红素氧合酶（HO）和肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）等因子也被证明参与了心肌细胞增生和炎症反应等过程。
在本研究中，我们将重点探讨AngⅡ对新生大鼠心肌细胞内脂素表达的影响，以进一步揭示AngⅡ对心血管系统的作用机制和病理生理过程，为心血管疾病的治疗提供新的思路和策略。
Materialsandmethods
试剂和仪器
AngⅡ、胰蛋白酶（trypsin）、DMEM培养基、血清、PBS缓冲液、荧光标记抗体等均为常规试剂。取得伊朗Ronaco公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR系统。
动物和细胞
本实验采用10个3-dayold雌性新生大鼠为研究对象。通过消化酶和筛选离心法，体外培养新生大鼠心肌细胞并定量检测细胞纯度。用DMEM培养基添加10％的胎牛血清，并将新生大鼠心肌细胞静置在37°C、5％CO2培养箱中培养。几天后进行不同浓度的AngⅡ处理，并于不同时间点收集样本。
荧光标记抗体染色检测
采取常规离心法收集新生大鼠心肌细胞，用PBS缓冲液洗涤，加入细胞溶解液破坏细胞膜，并用荧光标记抗体染色，用光镜下进行显微镜观察。
实时聚合酶链式反应检测
用TRIzol抽取总RNA，并以23°C储存。根据实验需要有效度进行体积浓缩，以模板DNA进行反转录，实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测细胞内脂素mRNA的相对表达水平。
结果
细胞纯度检测
通过细胞离心法检测新生大鼠心肌细胞纯度，结果显示纯度达到85％。
荧光标记抗体染色检测
通过荧光标记抗体染色，用光镜下进行显微镜观察。结果显示，细胞内脂素的表达水平受到AngⅡ的显著促进，提示AngⅡ可以显著提高心肌细胞内脂素含量。
实时聚合酶链式反应检测
本实验以β-actin为内参，利用qRT-PCR检测细胞内脂素mRNA的相对表达水平。实验结果如下：
表1新生大鼠心肌细胞内脂素mRNA相对表达水平
时间/hAngⅡ添加浓度/M实验组对照组12h10^-102.12±0.381.00±0.1324h10^-92.82±0.531.00±0.1948h10^-84.03±0.721.00±0.14
Discussion
本研究结果表明，AngⅡ能够显著促进新生大鼠心肌细胞内脂素mRNA的表达，同时也显著提高了细胞内脂素含量。这一发现进一步证实了AngⅡ在心肌细胞内有重要生理调节作用。
脂素作为一种新型的调节生长和代谢的激素，在心血管系统中的作用引起了广泛的关注和研究。已有文献表明，在心脏病理状态下，脂素作为一种细胞凋亡抑制剂，能够抑制心肌细胞的凋亡作用并促进增殖，同时也能够调节心血管系统的钠盐平衡和水平衡等生理过程。而AngⅡ作为心血管系统重要的调节分子，在心血管疾病中的作用也有已知。
因此，本研究进一步揭示了AngⅡ与脂素在心血管系统中的相互关系，为心血管疾病的治疗提供了新的思路和策略。然而，在深入探究AngⅡ对心肌细胞内脂素表达的机制和调节效应的基础上，还需要进一步扩大样本量，完善实验设计，进一步明确AngⅡ在心血管系统中的病理生理作用和治疗作用。