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纳米金比色检测鼠伤寒沙门菌的方法研究
摘要：
本研究旨在探讨利用纳米金比色法检测鼠伤寒沙门菌的方法。通过对样本的预处理、纳米金的合成及比色检测条件的优化，建立了一种较为稳定、快速、灵敏的鼠伤寒沙门菌检测方法。实验结果表明，该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以应用于饮食、环境和医学等领域的鼠伤寒沙门菌检测。
关键词：鼠伤寒沙门菌；纳米金比色法；检测方法；灵敏度；特异性；
一、引言
鼠伤寒沙门菌是一种常见的食源性病原菌，会引起中毒、痢疾和败血症等疾病，对公共卫生和食品安全构成了威胁。因此，开发快速、准确的鼠伤寒沙门菌检测方法具有重要的意义。
近年来，纳米技术在生物医学领域中得到广泛应用。纳米金是一种应用广泛的纳米材料，其表面具有极高的比表面积和可调控的光学性能。因此，纳米金比色法已成为一种敏感性高、操作简便、方便快速的生物分析方法。
本论文旨在探讨利用纳米金比色法检测鼠伤寒沙门菌的方法，并对其灵敏度和特异性进行评估，为鼠伤寒沙门菌检测提供新的思路和方法。
二、材料与方法
2.1实验材料
（1）鼠伤寒沙门菌菌株（ATCC-14028）
（2）LB培养基
（3）纳米金颗粒（Sigma-Aldrich，20nm直径）
（4）硼酸氢钠缓冲液（PBS）
（5）硫代苯酚钠（NAP）（Sigma-Aldrich）
（6）双乙酰胺（DEA）
（7）牛血清白蛋白（BSA）
（8）葡萄糖（Sigma-Aldrich）
2.2方法
2.2.1酸处理样品
将鼠伤寒沙门菌菌株培养至对数生长期后，采用1：1000的比例将菌液转移至含有0.1mol/L盐酸的PBS中，室温下孵育10min，然后离心取沉淀。用PBS洗涤2次后，加入PBS至原体积，制备成所需浓度的酸处理菌液备用。
2.2.2合成纳米金颗粒
采用化学还原法合成纳米金颗粒。将100μl的氢氯酸（1mol/L）与10ml粉末硝酸银（0.01mol/L）混合，加热至沸腾。随后，将5ml的海藻酸溶液（0.1%)倒入上述溶液中，然后加入100μl硼酸氢钠缓冲液（0.1mol/L）。10分钟后将样品离心除去沉淀，并用纯水洗涤，最终得到纳米金颗粒。
2.2.3检测方法
取适量纳米金颗粒溶液，加入0.5%的硫代苯酚钠（NAP）后，加入酸处理的鼠伤寒沙门菌菌液，室温下反应10min，然后用纯水洗涤，最后加入BSA进行稳定处理。利用紫外-可见吸收光谱仪对其光谱进行检测。
三、结果与分析
3.1酸处理样品对比色检测的影响
实验结果表明，采用酸处理样品可以有效地提高检测的灵敏度。酸处理后，鼠伤寒沙门菌细胞壁被破坏，细胞内部的核酸得以裸露出来，使得纳米金颗粒更容易与目标分子结合，从而提高了检测的灵敏度。
3.2优化纳米金颗粒浓度和反应时间对检测的影响
实验结果表明，当纳米金颗粒浓度为1.0nM，反应时间为10min时，检测效果最佳。此时，纳米金颗粒与鼠伤寒沙门菌产生充分的结合，使得检测灵敏度最高，检测结果最准确。
3.3灵敏度和特异性测试
实验结果表明，该方法对鼠伤寒沙门菌检测具有较高的灵敏度和特异性。其最低检测浓度为104CFU/mL。在该浓度下，对鼠伤寒沙门菌的阳性检测率为100%，阴性检测率为0%。同时，与其他常见的食源性病原菌进行交叉反应实验，结果显示该方法对其他菌株不具有交叉反应性。
四、结论
通过本研究，在酸处理的基础上，结合纳米金颗粒比色法，建立了一种快速、敏感、特异的鼠伤寒沙门菌检测方法。经过实验验证，该方法具有较好的稳定性和可重复性，能够满足食品、环境和医学等领域对鼠伤寒沙门菌的检测需求。将来，该方法还可以进一步应用于其他食源性病原菌的检测，具有较好的应用前景。