红景天苷对糖尿病大鼠心肌细胞保护作用的研究.docx

红景天苷对糖尿病大鼠心肌细胞保护作用的研究
摘要：
本次研究旨在探究红景天苷对糖尿病大鼠心肌细胞的保护作用，并探究其可能的分子机制。在本次实验中，采用分离培养的糖尿病大鼠心肌细胞，分别用葡萄糖高浓度模拟高血糖环境，以及添加红景天苷后进行诱导，并对比两种模拟条件下心肌细胞的存活率、ROS生成量以及AMPK/mTOR等信号通路的表达量。结果表明，红景天苷能够显著提高模拟高血糖环境下的心肌细胞存活率，降低ROS的生成量，并且提高AMPK/mTOR的表达量。本次研究证明了红景天苷对糖尿病大鼠心肌细胞的保护作用，并提示红景天苷可以作为一种潜在的糖尿病治疗药物。
关键词：红景天苷；糖尿病；心肌细胞；AMPK/mTOR信号通路
Abstract:
Thisstudyaimedtoinvestigatetheprotectiveeffectsofsalidrosideondiabeticratcardiomyocytesandexploreitspossiblemolecularmechanisms.Inthisstudy,diabeticratcardiomyocyteswereisolatedandcultured.Highglucoseconcentrationwasusedtosimulatehighbloodglucoseenvironment,andsalidrosidewasaddedtoinduceandcomparethesurvivalrate,ROSgenerationandtheexpressionofAMPK/mTORsignalingpathwayofcardiomyocytesundertwosimulationconditions.Resultsshowedthatsalidrosidecouldsignificantlyincreasethesurvivalrateofcardiomyocytesunderhighbloodglucoseenvironment,reducetheproductionofROS,andincreasetheexpressionofAMPK/mTOR.Thisstudyconfirmedtheprotectiveeffectsofsalidrosideondiabeticratcardiomyocytesandsuggestedthatsalidrosidecouldbeapotentialtherapeuticdrugfordiabetes.
Keywords:Salidroside;Diabetes;Cardiomyocytes;AMPK/mTORsignalingpathway
正文：
一、研究背景
糖尿病是全球范围内的一种常见慢性代谢性疾病，其发病率与生活方式和食物选择息息相关。高血糖是糖尿病患者普遍存在的症状之一，长期高血糖环境会对身体各个系统造成危害。心血管系统是糖尿病患者的常见并发症之一，多种心血管疾病的发生与糖尿病密切相关。心肌细胞的保护是预防糖尿病心血管并发症重要的手段之一。
红景天苷是从红景天植物中提取的一种化合物，具有抗氧化、抗炎和抗衰老等作用。已有研究表明，红景天苷能够减轻心肌缺血再灌注损伤、心肌细胞凋亡以及心肌纤维化等心血管疾病。但是，红景天苷对于糖尿病及糖尿病心肌细胞的作用和机制尚未完全明确。
二、实验设计方法
1.实验材料
红景天苷，糖尿病大鼠心肌细胞，RPMI-1640培养基，10%胎牛血清，高浓度葡萄糖（25mM）。
2.实验设计
将糖尿病大鼠心肌细胞分成高血糖组（添加25mM葡萄糖）和红景天苷处理组（添加红景天苷后再添加25mM葡萄糖）。测定各自组中心肌细胞的存活率、ROS的生成量以及AMPK/mTOR等信号通路的表达水平，并在两组之间进行对比。
3.实验方法
3.1细胞培养
将糖尿病大鼠心肌组织泡在消化液中，放在37°C恒温箱中进行消化。滴加等体积DMEM细胞培养基，振动离心，取上清分离细胞，离心并去除上清，珠显出镜下检查心肌细胞数量及活力。将心肌细胞悬液与RPMI-1640培养基或含有25mM葡萄糖的培养基混合，定植在96孔细胞培养板上，添加不同浓度的红景天苷药物（0、20、50和100μM），培养24小时。
3.2细胞存活率检测
用CCK-8法检测心肌细胞存活率。上清10%比色龙水或DMSO为对照，三孔重复。利用康宁Elisa阅读仪，570nm波长下的吸光度读数作为存活率检测。
3.3诱导ROS生产
添加H2O2诱导ROS产生，RPMI-1640培养基中添加不同浓度红景天苷药物，随后加入100μM的H2O2诱导。
3.4Westernblotting检测AMPK/mTOR表达
将心肌细胞收集并缓冲，用pan-AMPK抗体、pan-mTOR