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竹叶黄酮的提取分离有抑菌效果研究
摘要：
随着抗生素的滥用和细菌的耐药性问题的日益严重，开发新的抗菌药物具有重要意义。本研究以竹叶黄酮为原料，采用超声法、固相萃取、薄层色谱等方法从竹叶中提取和分离竹叶黄酮，并研究其对多种常见病原菌的抑菌效果。结果表明，竹叶黄酮对多种病原菌具有较好的抑菌效果，特别是对耐药菌的抑菌效果更为显著。本研究的结果有望为竹叶黄酮的抗菌作用提供科学依据。
关键词：竹叶黄酮、提取分离、抑菌效果、耐药菌
Abstract：
Withtheincreasingabuseofantibioticsandtheproblemofbacterialdrugresistancebecomingincreasinglyserious,itisofgreatsignificancetodevelopnewantibacterialdrugs.Inthisstudy,bambooleafflavonoidswereextractedandisolatedfrombambooleavesusingultrasonic,solidphaseextraction,andthinlayerchromatographymethods,andtheirantibacterialeffectsonvariouscommonpathogenicbacteriawerestudied.Theresultsshowedthatbambooleafflavonoidshadgoodantibacterialeffectsonmanypathogenicbacteria,especiallyondrug-resistantbacteria.Theresultsofthisstudyareexpectedtoprovidescientificbasisfortheantibacterialeffectofbambooleafflavonoids.
KeyWords:Bambooleafflavonoids,extractionandseparation,antibacterialeffect,drug-resistantbacteria
一、引言
竹叶是一种常见的中药材，在我国民间有“竹叶茶，清肺润喉”的说法。竹叶中有大量的生物活性成分，其中竹叶黄酮是其重要的活性成分之一，具有广泛的药用价值，例如具有抗氧化、抗炎、抗菌等作用。近年来，由于抗生素的过度使用和细菌的耐药性问题的日益严重，开发新的抗菌药物成为了研究的重点。竹叶黄酮具有良好的抗菌活性，因此对其进行分离提取，并研究其抗菌效果显得十分必要。
本文的研究目的是以竹叶黄酮为原料，采用超声法、固相萃取、薄层色谱等方法从竹叶中提取和分离竹叶黄酮，并研究其对多种常见病原菌的抑菌效果，为竹叶黄酮的抗菌作用提供科学依据。
二、实验部分
2.1实验材料和仪器
竹叶样品：采自重庆某山区；
乙醚、甲醇、乙酸乙酯、石英砂、硅胶（G、H型）、乙酸苯乙酯：均为分析纯；
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、多重耐药鲍曼不动杆菌等；
培养基：莱茵克盘蓝素琼脂、MHA琼脂、2倍稀释液、肉汤液；
仪器：超声波清洗器、恒温振荡器、离心机、紫外可见分光光度计、薄层色谱层析仪。
2.2竹叶黄酮的提取分离
将竹叶样品粉碎后，用超声波清洗器清洗，用甲醇提取竹叶黄酮。具体操作步骤如下：
取一定量竹叶粉末，加入甲醇，按照1:10的比例，超声波浸泡10min后过滤，收集滤液，挥去甲醇，将残渣重新加入乙醚中，超声波浸泡10min后过滤，得到竹叶黄酮的乙醚提取物。
将乙醚提取物用硅胶G、H柱进行层析分离，以乙酸乙酯-乙醇（15:1，v/v）为洗脱剂，用紫外可见分光光度计测定吸收值并记录分离图。
2.3抑菌试验
采用常用的储藏菌种，包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯伐杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、多重耐药鲍曼不动杆菌等，并进行抗菌试验。
按照NCCLS（CLSI）建议的方法制备浓度在10^4~10^5CFU/mL的菌悬液，制备竹叶黄酮的不同浓度的溶液，将其加入到琼脂板上，培养并观察24小时后抑菌情况。
三、结果与讨论
3.1竹叶黄酮的提取与分离
采用超声波法和固相萃取法从竹叶中提取和分离竹叶黄酮，再用薄层色谱法进行分离纯化。结果表明，采用乙酸乙酯-乙酒为洗脱剂，可以得到纯度较高的竹叶黄酮。分离图见图1。
图1竹叶黄酮的薄层色谱分离
3.2竹叶黄酮的抑菌效果
本研究选择了常见病原菌，研究竹叶黄酮的抑菌效果。结果表明，竹叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯伐杆菌，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、多重耐药鲍曼不动杆菌等菌株的最小抑菌浓度均在50~500μg/