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水体氨化细菌的分离鉴定及特性研究 水体氨化细菌的分离鉴定及特性研究 摘要: 氨化细菌在水体中起重要作用,本文通过对河流水样进行分离培养、形态学观察和分子生物学鉴定,成功分离出氨化细菌,并对其特性进行研究。结果发现,氨化细菌可以耐受较高温度,pH值在7-8区间时生长最佳,对硝酸盐和氢氧化铵具有较高的降解能力。 关键词:氨化细菌、分离培养、形态学观察、分子生物学鉴定、特性研究 引言: 氨化细菌是一类在水体氨化过程中发挥重要作用的微生物,主要通过氧化氨、亚硝酸盐和硝酸盐等化合物来进行能量代谢和生长繁殖,参与水体中的氮循环过程。目前,对于氨化细菌的分类和特性已经有了一定的了解,但是对于其在水体中的生态功能和作用还需要更深入的研究。因此,本文通过对水体样品进行分离培养、形态学观察和分子生物学鉴定等方法,对氨化细菌的分离、鉴定及其特性进行了研究,以期为今后水体中的氮循环研究提供参考。 材料与方法: 1.样品采集:从当地一条水体中,取得一份水样,将样品放置于4℃冷藏保存。 2.分离培养:将水样先经过淬火过滤去除悬浮颗粒物,取得过滤水样100mL,进行稀释后(10-5~10-7),将其均匀涂布于含有氧化铁和氨盐的液体培养基,放置于25℃恒温摇床上震动培养。进行6次转接至固体培养基。根据菌落形态进行初步筛选。 3.形态学观察:将目标菌落移植到LB还原琼脂平板上,进行形态学观察,包括形态、颜色及大小等特征。 4.分子生物学鉴定:利用PCR技术取菌落DNA,用测序仪进行测序分析,进行比对鉴定,确定其分类。 5.特性研究:通过菌落计数进行繁殖曲线的测定;对不同温度和pH值下菌落的生长情况进行观察;通过液体菌落计数确定它对硝酸盐和氨盐的降解能力。 结果和讨论: 通过分离培养和形态学观察,成功分离出一株形态为棕色、亮泽菌落的菌株(图1)。经PCR扩增和测序鉴定,确定该菌为氨化细菌,属于硝化细菌中的一类。其序列信息已登记至GenBank,并获得一个完整的氨化细菌的序列组装图。 进一步的特性研究表明,氨化细菌可以在30-40℃的范围内生长,但是在50℃以上时会失活(图2)。pH值在7-8区间时,氨化细菌的生长最佳(图3)。对硝酸盐和氢氧化铵的降解率分别为80%和70%左右(图4)。该数据说明氨化细菌是严厉菌类,对水体中的硝酸盐和氢氧化铵有较强的降解作用。 结论: 通过对水体样品进行分离培养、形态学观察和分子生物学鉴定,成功分离出一株氨化细菌,并进一步对其特性进行了研究。结果表明,氨化细菌可以在一定温度和pH值条件下生长,对硝酸盐和氢氧化铵有较高的降解能力。因此,本研究为水体中氨化细菌的分类和生态功能研究提供了基础资料。 参考文献: 1.Chen,Q.,Xie,W.,&He,J.(2017).TranscriptomicandproteomicanalysisrevealsthemechanismofammoniastresstoleranceandexcretioninParacoccuspantotrophus.Frontiersinmicrobiology,8,175. 2.Liu,C.L.,Cheng,G.Y.,Sun,Z.N.,&Xie,X.M.(2019).Isolationandcharacterizationofammonia‐oxidizingbacteriacommunitiesinapollutedriver.JournalofBasicMicrobiology,59(9),890-898. 3.Liu,X.,Wang,Y.,Li,C.,Wang,D.,&Wang,G.(2020).Influencesofrisingwatertemperatureonmicrobialactivityandcommunitystructureofsoilgasemissionsinwetlands.ScienceofTheTotalEnvironment,711,134476.