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汉防己甲素对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其作用机制研究
胃癌是一种高发的恶性肿瘤，在世界范围内都有着较高的发病率和死亡率。虽然在现代医学领域中，治疗手段不断地更新，但是对于胃癌的治疗仍然具有很大的难度，所以人们一直在寻找更加有效的治疗手段。汉防己甲素作为一种普遍存在于植物中的生物活性成分，其具有明显的抗肿瘤作用。因此，本文研究了汉防己甲素对于BGC-823细胞凋亡的影响，以及其作用机制。
一、实验方法
1.材料
（1）汉防己甲素，纯度为98%（Aladdin，CAS号：965-52-6）
（2）DMEM培养基，FBS，EDTA，PBS，1×RIPAlysis缓冲液以及各种生化试剂（MedChemExpress）
（3）BGC-823细胞
2.实验方法
（1）细胞的培养
将BGC-823细胞分装于96孔板中，每孔约有5×103个细胞。将DMEM培养基中加入10%的FBS、1%的Penicillin/Streptomycin混合液,并放在37℃、5%CO2培养条件下。
（2）药物处理
将汉防己甲素溶于DMSO中，制备浓度为10μg/mL到100μg/mL的药物。
（3）MTT实验
将不同浓度的汉防己甲素溶液分别添加到96孔板中，每孔加入100μL的细胞悬液，培养24h、48h、72h后加入20μL的MTT溶液，最后在黑暗条件下，800rpm离心15分钟，移除无色原液，并在150μLDMSO溶溶液中震荡10min，用ELISA测量A570。
（4）细胞凋亡分析
将细胞添加至药物中后，再培养24h、48h、72h后，用AnnexinV-FITC/PI染色法进行检测，最后通过流式细胞术（FACSCalibur）分析细胞凋亡情况。
（5）Westernblot实验
采集BGC-823细胞，用1×RIPAlysis缓冲液溶解，离心下沉，采用BCAProteinAssay试剂盒测量总蛋白质含量。将10ug的总蛋白质通过10％SDS-PAGE胶分离并电转移至PVDF膜，之后使用对应的一抗和二抗，最后通过ECL检测。
二、实验结果
1.MTT实验结果
经MTT实验发现，随着药物浓度的增加，汉防己甲素对BGC-823细胞的抑制作用增强。如果采用72小时的观察时间，当药物浓度为80μg/mL时，其对于BGC-823细胞生长的抑制率可达到50%以上（P<0.05），因此，我们选择80μg/mL的药物浓度进行之后的实验。
2.细胞凋亡分析结果
通过AnnexinV-FITC/PI染色法检测到，经过80μg/mL的汉防己甲素处理后，预计道出的细胞死亡率分别为14.6%（24h）、32.4%（48h）、45.8%（72h）(P<0.05)，而对照组则分别为6.7%、10.3%和13.2%。因此，证明了汉防己甲素在BGC-823细胞中可明显影响细胞生长和凋亡。
3.Westernblot实验结果
采用Westernblot实验探究了汉防己甲素是否能够通过调控相关蛋白的表达，来发挥其对于BGC-823细胞凋亡的影响。结果表明，与对照组相比，汉防己甲素处理后BAX蛋白表达量显著增加（P<0.05），而Bcl-2蛋白表达量则明显降低（P<0.05），这表明汉防己甲素通过调控BAX和Bcl-2蛋白表达，诱导了BGC-823细胞的凋亡。
三、讨论与结论
通过以上的实验，我们发现，汉防己甲素对于BGC-823细胞具有良好的抑制作用，同时还能够通过调控表达BAX、Bcl-2等蛋白，来发挥其良好的抗肿瘤作用。因此，我们推测汉防己甲素可能通过抑制胃癌细胞的生长和诱导细胞凋亡来治疗胃癌。
在实验中，我们还发现汉防己甲素的抗肿瘤作用还与误差的时间有关。因此，我们需要采用更多更深入的研究手段，来深入探究汉防己甲素的作用机理，以及如何更好地使用其治疗胃癌。