基于CreLoxP系统的皮肤特异性表达Tβ4基因载体构建及转基因细胞系筛选的任务书.docx

基于CreLoxP系统的皮肤特异性表达Tβ4基因载体构建及转基因细胞系筛选的任务书
任务书
一、任务背景
Tβ4（Thymosinβ4）是一种小分子蛋白质，能够促进细胞增殖、分化和修复，进而促进组织修复，对皮肤损伤修复具有重要作用。因此，将Tβ4基因引入皮肤细胞，实现Tβ4的快速表达，对于促进皮肤损伤修复具有重要的意义。而CreLoxP系统是一种广泛应用于转基因技术的基因操作系统，可以实现基因的特异性表达，并具有操作简单、稳定性高等优点。因此，本任务旨在基于CreLoxP系统构建皮肤特异性表达Tβ4基因载体，并通过细胞系筛选获得高效稳定的Tβ4表达细胞系，为进一步研究Tβ4在皮肤损伤修复中的作用提供实验基础。
二、任务目标
1.构建适合CreLoxP系统的皮肤特异表达Tβ4的载体。
2.筛选获得高效稳定的Tβ4表达细胞系。
三、任务内容
1.CreLoxP系统的构建
本任务将采用CreLoxP系统实现基因的特异性表达，需要先构建适合该系统的载体。具体步骤如下：
（1）选择含有Cre重组酶识别序列的载体，例如pLoxP。
（2）PCR扩增Tβ4基因并克隆至pLoxP载体中，得到pLoxP-Tβ4。
（3）使用Sox2-Cre质粒介导pLoxP-Tβ4载体转染皮肤细胞株，获得基因特异表达细胞系。
2.细胞系筛选
为了获得高效稳定的Tβ4表达细胞系，需要对转染皮肤细胞株进行筛选。具体步骤如下：
（1）使用荧光素酶报告基因，例如pGL4.13，构建pLoxP-pGL4.13载体。
（2）将pLoxP-pGL4.13载体与pLoxP-Tβ4载体共转染皮肤细胞株。
（3）筛选荧光素酶阳性细胞，分离并培养得到单克隆细胞株。
（4）检测单克隆细胞株的Tβ4表达水平，选择Tβ4表达量高且稳定的细胞株进行后续实验。
四、任务进度安排
1.第一周：文献资料搜集，设计实验方案。
2.第二周：进行CreLoxP系统相关基因克隆实验。
3.第三周：进行重组载体转染细胞实验。
4.第四周：进行细胞荧光素酶筛选实验。
5.第五周：检测并鉴定单克隆细胞株。
6.第六周：总结实验结果，撰写实验报告。
五、任务成果
1.构建成功适合CreLoxP系统的皮肤特异表达Tβ4基因载体。
2.筛选成功获得高效稳定的Tβ4表达细胞系。
3.完成实验报告。
六、参考文献
1.丁彦锋,庄芝芬,刘晓明.鸭胚卵泡结构蛋白基因的克隆及表达[J].福建农业学报,2008,23(3):236-239.
2.汪华霞.人肝细胞特异性表达腺病毒载体的构建与检验[D].重庆医科大学,2008.
3.朱熙.人乳头瘤病毒E7蛋白siRNA的构建及对宫颈癌细胞系HeLa-Basalt的影响研究[D].南昌大学,2010.