中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因克隆与功能研究的任务书.docx

中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因克隆与功能研究的任务书
任务书
项目名称:中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因克隆与功能研究
项目背景：
近年来，RNA干扰（RNAi）技术已成为生命科学研究领域的新热点之一，这一技术基于生物体内的天然抗病机制，通过生物体内小RNA的介导，在多种生物中已被成功用于基因沉默、基因表达与调控等方面的研究，RNAi技术在许多生物方面都表现出出色的潜力。长期以来，RNAi技术的应用范围逐渐扩大，在生殖、抗病、抗害虫、抗逆境以及对环境中污染物等方面的研究都取得了良好的效果。现在，作为一种重要的新型分子遗传学技术，RNAi技术已被广泛应用于植物和动物等生物中。
中华鳖，是一种比较重要的淡水爬行动物，主要分布于中国的江河和湖泊中，供人们食用和药用，前期已经针对中华鳖进行了一些研究，诸如生长与发育、组织器官形态、疾病防治等。草鱼，是我国著名的淡水经济鱼类之一，众多研究表明，草鱼的爆炸生长与免疫防病能力有很大关系。而RNAi技术可对淡水鱼类与之相关的性状进行基因修饰，从而更好地改进淡水鱼类生长与免疫能力。
任务要求：
1.在中华鳖和草鱼中克隆Ⅱ型干扰基因；
2.研究克隆的Ⅱ型干扰基因的特征，并通过比对分析进行验证；
3.使用RNAi技术抑制Ⅱ型干扰基因表达，并进一步研究其对中华鳖和草鱼的生长与免疫能力的影响；
4.利用PCR、蛋白质印迹分析等技术验证RNAi靶向抑制后目标基因的消减情况。
研究内容：
1.中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因的克隆
使用生物信息学技术，设计中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因的克隆引物，并通过参考已有文献以及多样性筛选确定可靠性；接着，运用PCR技术进行全长扩增，将扩增的PCR产物将被纯化并进行凝胶回收和克隆，获取克隆目的基因序列。
2.中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因特征验证
将克隆得到的重组克隆载体通过序列比对分析进行验证，并在species.txt上对克隆的物种进行比对；同时，利用蛋白质组分离、电泳和印迹等方法，进行蛋白特性分析，并探究蛋白对受体分子之间的调节作用。
3.RNAi靶向抑制Ⅱ型干扰基因的表达
使用RNAi技术靶向抑制Ⅱ型干扰基因在中华鳖和草鱼中的表达，探究靶向基因靶向抑制后假基因和有实际意义的基因表达水平的变化情况。
4.研究RNAi靶向抑制Ⅱ型干扰基因对生长与免疫能力的影响
通过RNAi靶向抑制Ⅱ型干扰基因，探究其对中华鳖的生长与草鱼的免疫能力的影响。通过测定实验组和对照组的生长或免疫参数的变化情况，并对变化与RNAi产生的影响进行分析。
5.验证靶向抑制后目标基因的消减情况
通过PCR技术、蛋白质印迹、RT-PCR等方法验证RNAi靶向抑制对目标基因的消减效果。并分析其他参数的变化情况，以确定RNAi技术对Ⅱ型干扰基因进行靶向抑制的效果。
研究成果：
1.中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因的克隆并通过比对验证，发现两者表现出异构和同源性的结果。
2.利用RNAi技术成功靶向抑制Ⅱ型干扰基因表达，且生长和免疫能力的参数有所改善。
3.确认了RNAi技术可作为一种可靠且高效的分子遗传学技术，对中华鳖和草鱼Ⅱ型干扰基因的研究为进一步生长与免疫技术的创新提供了理论基础。
参考文献:
1.Tang,D.,Wang,K.,Tang,X.Y.,Fu,Y.N.,Yue,H.M.,Xing,Z.Y.,...&Wu,X.G.(2013).Molecularcharacterizationandexpressionanalysisofinterleukin17fromgrasscarp(Ctenopharyngodonidella).Fish&shellfishimmunology,34(2),410-417.
2.Yang,G.,Zhang,Y.,Hu,S.,Ma,X.,Xu,C.,Hei,Z.,&Wang,K.(2018).Interleukin-2geneinChinesesoft-shelledturtlePelodiscussinensis:Cloning,tissuedistribution,andexpressionanalysis.Developmental&ComparativeImmunology,84,131-138.
3.Wang,J.,Liu,H.,Li,Z.,Huang,X.,&Yang,M.(2019).RNAi-mediatedsilencingofCd14andTlr2genesincommoncarp(Cyprinuscarpio)promotesresistancetoAeromonashydrophilainfection.Aquaculture,518,734762.