虎红平板凝集实验.doc

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虎红平板凝集试验（RBPT）检测布鲁氏菌病的原理和方法
由于HYPERLINK"http://www.bacteria.cn/html/tag/brucella"\o"布鲁氏菌是重要的胞内寄生人兽共患病原菌，呈小球杆状菌，革兰氏阴性。主要感染牛、羊、猪、狗等动物，可传播给人类，其临床症状特点为波浪热、多汗、关节痛、肝脾肿大及不孕不育等。"\t"_blank"布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长，所以HYPERLINK"http://www.bacteria.cn/html/tag/brucella/"\o"Viewallpostsin布鲁氏菌"\t"_blank"布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。
虎红平板HYPERLINK"http://www.bacteria.cn/html/tag/%e5%87%9d%e9%9b%86%e8%af%95%e9%aa%8c/"\o"Viewallpostsin凝集试验"\t"_blank"凝集试验（RBPT）灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。
检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。

试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6-3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。
虎红平板凝集试验具体方法如下：
一、材料准备
1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
2、被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分成4cm2的方格。
4、吸管或移液器，适于滴加0.03mL液体。
5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。
二、操作方法
1、实验前，应将血清和抗原在室温放置30-60min。
2、将玻璃板上各格标记被检血清号，然后加相应被检血清0.03mL。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原0.03mL。
4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。
三、结果判定
1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。

四、方法评价
1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，方法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；
2、该方法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。
3、因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白试验有较高的吻合率。
4、该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备抗原应予以检查、标化方可应用。