PARP抑制剂抗肿瘤机制及其与Chk1抑制剂联合用药研究的中期报告.docx

PARP抑制剂抗肿瘤机制及其与Chk1抑制剂联合用药研究的中期报告
PARP抑制剂抗肿瘤机制及其与Chk1抑制剂联合用药研究的中期报告
一、背景
PARP（聚合酶-腺苷酸二磷酸核糖化酶）是一种重要的DNA修复酶，主要参与单一链DNA断裂（SSB）的修复。PARP抑制剂的出现开创了一种全新的肿瘤治疗策略，即利用PARP抑制剂加强导致DNA双链断裂（DSB）的放疗和化疗药物的疗效，利用PARP抑制剂选择性杀死BRCA1/2缺陷类型的肿瘤细胞。PARP抑制剂可以通过以下几种方式增强放疗或化疗药物的作用：一是增加肿瘤细胞DNA损伤的程度；二是降低肿瘤细胞对修复DSB的DNA损伤的反应；三是增加自然免疫反应。PARP抑制剂已经在卵巢癌、乳腺癌和前列腺癌等多种肿瘤中得到了成功的应用。
Chk1（checkpointkinase1）是细胞周期中的G2检查点和S期检查点的主要调节因子，参与细胞DNA损伤应答过程中，调节细胞周期和DNA修复的关键分子。Chk1抑制剂可以通过抑制Chk1的活性，破坏DNA损伤应答的调控机制，直接导致细胞死亡，并增强DNA损伤后放疗和化疗药物的疗效。Chk1抑制剂已经在临床前和临床试验中发展为一种新型的肿瘤治疗药物。
二、研究目的
本研究的主要目的是探究PARP抑制剂ABT-888和Chk1抑制剂MK-8776联合用药在体外和体内对肿瘤细胞的作用及其分子机制。本研究将对其联合用药后的细胞凋亡、细胞周期和DNA损伤应答进行深入研究，为PARP抑制剂和Chk1抑制剂联合用于临床肿瘤治疗提供理论和实践依据。
三、研究方法
1.细胞培养
本研究选用人类乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为研究对象，分别在DMEM培养基和RPMI1640培养基中培养，添加10%FBS和1%抗生素混合液，37℃、5%CO2培养。
2.实验药物及实验组设计
本研究选用PARP抑制剂ABT-888和Chk1抑制剂MK-8776，分别单独使用或联合使用。研究将细胞分为以下几组：对照组，ABT-888组，MK-8776组，ABT-888+MK-8776组，根据实验需要分别添加不同剂量的ABT-888和MK-8776。
3.细胞生长曲线和细胞凋亡检测
MTT法检测细胞的生长曲线；AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。
4.细胞周期和DNA损伤应答检测
流式细胞术检测细胞周期及DNA损伤应答标志物γ-H2AX。
四、研究进展及预期成果
目前，我们已经成功地实现了肿瘤细胞的体外实验，并初步确定了合适的药物剂量范围。我们发现，PARP抑制剂ABT-888和Chk1抑制剂MK-8776单独应用能够有效抑制肿瘤细胞的生长和增殖；在联合应用后，对于肿瘤细胞的抑制作用更加明显。中间结果也表明，该联合用药方案对于促进细胞周期G2/M期的停留和引起细胞凋亡有着显著的作用。此外，我们还检测到了显著的DNA损伤应答标志物γ-H2AX的增加。
在接下来的研究中，我们将进一步深入探究PARP抑制剂和Chk1抑制剂联合应用后对于肿瘤细胞各项生化指标的影响，分析这种联合应用方案的分子机制，进一步确定合适的药物剂量和方案。我们的预期成果是：研究出一种基于ABT-888和MK-8776联合用药的新型肿瘤治疗策略，为临床肿瘤治疗提供更加有效和定制化的治疗手段。