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miR--709对小鼠肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响的任务书
任务书
题目：miR-709对小鼠肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响
研究背景及意义：
肝癌是全球最常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率均居恶性肿瘤前列。虽然近年来治疗手段不断增加，但肝癌的治疗效果仍然较为不理想，生存率较低。因此，寻找新的治疗靶点成为肝癌治疗研究的热点。
miRNA是一类长度约为22个核苷酸的小分子RNA，可调控基因表达从而影响细胞生长、分化、凋亡和代谢等生命活动。过去的研究表明，miRNA在肝癌的疾病进程中起着重要的调节作用，和肝癌的发生、发展密切相关，是新型肝癌治疗的潜在靶点。miR-709最初被发现与神经元发育相关，进一步研究表明miR-709在肿瘤细胞生长、增殖、转移等方面也起着关键的调控作用，但其在小鼠肝癌细胞中的作用尚不清楚。
因此本研究意在探究miR-709对小鼠肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响，为新型肝癌治疗提供新的潜在靶点和治疗策略。
研究内容：
1.验证miR-709表达水平在小鼠肝癌细胞中的变化情况；
2.构建miR-709高表达或低表达的小鼠肝癌细胞株；
3.测定miR-709对小鼠肝癌细胞生长的影响，包括细胞增殖能力和细胞周期等指标；
4.测定miR-709对小鼠肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响；
5.探究miR-709对相关蛋白的表达的影响，以及miR-709对小鼠肝癌细胞增殖和侵袭的分子机制。
研究方法：
1.小鼠肝癌细胞株选用Hca-F细胞；
2.采用定量RT-PCR检测miR-709在Hca-F细胞中的表达水平；
3.使用Lipofectamine™2000转染技术将miR-709mimics和inhibitor转染入Hca-F细胞，构建miR-709高表达和低表达的细胞系；
4.通过MTT、CFSE、细胞周期分析等方法检测小鼠肝癌细胞增殖能力及增殖周期变化情况；
5.采用Transwell小室法检测小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭能力；
6.采用Westernblotting检测miR-709转染对相关蛋白的表达的影响。
研究预期结果：
1.测定miR-709在小鼠肝癌细胞中的表达水平并验证其变化情况；
2.构建miR-709高表达或低表达的小鼠肝癌细胞株，并分析其生长情况和周期变化；
3.测定miR-709对小鼠肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响；
4.通过Westernblotting检测miR-709转染对相关蛋白的表达的影响；
5.探究miR-709对小鼠肝癌细胞增殖和侵袭的分子机制。
研究意义：
1.对miR-709在小鼠肝癌细胞中的作用进行深入研究，丰富miRNA对肝癌发生和发展的调控机制的认识；
2.为寻找新型肝癌治疗靶点提供理论和实验依据，为肝癌治疗提供新的思路和方法。
参考文献：
1.BartelDP.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanism,andfunction[J].Cell,2004,116(2):281-297.
2.RupaimooleR,SlackFJ.MicroRNAtherapeutics:towardsaneweraforthemanagementandtreatmentofcancer[J].NaturereviewsDrugdiscovery,2017,16(3):203.
3.BaderAG.miR-34-amicroRNAreplacementtherapyisheadedtotheclinic[J].FrontiersinGenetics,2012,3:120.