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广谱苏云金芽孢杆菌(Bt)工程菌的构建及Bt抗肿瘤细胞活性研究
摘要
广谱苏云金芽孢杆菌(Bt)作为一种天然的生物杀虫剂在农业生产中得到广泛应用。近年来，人们开始关注Bt菌株在医药领域的应用前景。本研究通过基因工程技术构建一株Bt工程菌，并探究其对肿瘤细胞的抗生活性。结果显示，构建的Bt工程菌能够显著抑制肿瘤细胞的增殖，具有很高的抗肿瘤活性。这为Bt在肿瘤治疗领域的应用提供了新的思路和方法。
Introduction
苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)是一种常见的土壤中孢杆菌，在长期的进化过程中，Bt不断进化形成不同的菌株，其中包含的具有高毒力的双孢菌类(Btvar.israelensis、Btvar.kurstaki、Btvar.tenebrionis等)被广泛应用于农业生产中，作为一种天然的生物杀虫剂。Bt菌株具有很高的毒杀活性和比较特异的杀虫谱，但对于某些具有重要农业经济意义的害虫并没有很好的控制效果。
近年来，人们开始关注Bt菌株在医药领域的应用前景，研究表明，Bt菌株具有较高的抗菌和抗病毒活性，能够产生多种生物活性物质，包括蛋白质、肽类、多酚类等物质，这些物质对人类和动物的肿瘤、炎症、传染病等疾病具有极好的疗效。
本研究通过基因工程技术构建一株Bt工程菌，探究其对肿瘤细胞的抗生活性，为Bt在肿瘤治疗领域的应用提供新的思路和方法。
MaterialsandMethods
构建Bt工程菌
将pHT43-plasmid载体中的Cry1B基因克隆到BtHD-73菌株的表达载体pHT315上，用电穿孔法导入到BtHD-73菌株中。转化后用PCR验证转化是否成功，将表达Cry1B基因的Bt菌株称为HD-Bt。
准备肿瘤细胞
该研究采用人肝癌细胞HepG2作为研究对象。将该细胞株在DMEM培养基中，添加10%的胎牛血清和1%的青霉素/链霉素混合抗生素混合液，选用40mL的液氮保存，研究时采用PBS对细胞进行洗涤，离心去上清液后用DMEM再次培养。
MTT法测定Bt工程菌对人肝癌细胞活性的影响
采用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium-bromide)法测定Bt工程菌对肝癌细胞活性的影响。将Bt工程菌接种于不同质量浓度的HepG2细胞上，加入10μlMTT试剂后24h后读取OD值。
Results
构建Bt工程菌
将Cry1B基因克隆到BtHD-73菌株pHT315表达载体上，通过电穿孔法导入到BtHD-73菌株中，PCR验证转化后的BtHD-73菌株能够有效表达Cry1B基因，证明Bt工程菌的构建成功。
Bt工程菌对人肝癌细胞活性的影响
MTT法测定Bt工程菌对肝癌细胞活性的影响，结果显示，Bt工程菌能够显著抑制肝癌细胞的增殖，其抑制率随Bt工程菌浓度的增加而增加，该结果表明Bt工程菌具有很高的抗肿瘤活性(Figure1)。
Figure1.Bt工程菌对HepG2细胞活性的影响。MTT法检测Bt工程菌不同浓度对HepG2细胞的抑制作用。
Conclusion
本研究通过基因工程技术构建一株Bt工程菌，并探究其对肿瘤细胞的抗生活性。结果显示，构建的Bt工程菌能够显著抑制肝癌细胞的增殖，具有很高的抗肿瘤活性。这为Bt在肿瘤治疗领域的应用提供了新的思路和方法。未来需要进一步探究该菌株对其它类型肿瘤细胞的抗生活性，并对其生物活性物质的产生和作用机制进行更深入的研究。