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幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白表达的影响
摘要
本文通过实验研究幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白表达的影响。结果表明，幽门螺杆菌裂解液能够显著增加β-连环蛋白的表达，且其作用具有剂量依赖性。此外，通过Westernblot分析发现，裂解液作用后β-连环蛋白的分子量发生了明显的变化。综上，幽门螺杆菌裂解液能够促进β-连环蛋白的表达，并且能够改变其分子量，为幽门螺杆菌相关疾病的研究提供了一定的理论依据。
关键词：幽门螺杆菌；β-连环蛋白；裂解液；表达；分子量
Abstract
ThispaperstudiestheeffectofHelicobacterpylorilysateontheexpressionofβ-catenin.TheresultsshowthatHelicobacterpylorilysatecansignificantlyincreasetheexpressionofβ-catenin,anditseffectisdose-dependent.Inaddition,Westernblotanalysisfoundthatthemolecularweightofβ-cateninchangessignificantlyaftertheactionoflysate.Insummary,Helicobacterpylorilysatecanpromotetheexpressionofβ-cateninandchangeitsmolecularweight,providingatheoreticalbasisforthestudyofHelicobacterpylori-relateddiseases.
Keywords:Helicobacterpylori;β-catenin;Lysate;Expression;Molecularweight
1.引言
幽门螺杆菌（Helicobacterpylori）是人类胃部常见的一种细菌，已证实与胃炎、十二指肠溃疡、胃癌等多种疾病有关。近年来，不少研究表明幽门螺杆菌感染与许多肿瘤的发生、发展密切相关，其中β-连环蛋白（β-catenin）是一个关键的分子。β-连环蛋白作为一种重要的信号转导分子，在胃部上皮细胞的黏膜细胞间起着重要的作用，其异常表达与肿瘤的发生有关。
幽门螺杆菌能够产生多种蛋白水解酶分泌到外周，这些蛋白水解酶具有破坏宿主细胞结构和功能的作用，例如细胞间黏附和细胞骨架等。其中，裂解液可以通过将连接β-连环蛋白的连接蛋白分子——α-肌动蛋白（α-catenin）裂解从而影响β-连环蛋白的表达。为了深入研究幽门螺杆菌的致病机制和β-连环蛋白的调控机制，本文选择分析幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白表达的影响。
2.材料与方法
2.1实验材料
取自幽门螺杆菌培养过程中的裂解液。
2.2实验方法
2.2.1细胞培养
本文选取胃上皮细胞系MKN45为实验材料，用DMEM高糖培养基加10%胎牛血清（FBS）在37℃条件下培养，直到细胞贴壁生长，超过80%的细胞活性后进行实验。
2.2.2幽门螺杆菌裂解液的制备
用PBS洗涤培养好的幽门螺杆菌，离心后取上清，用0.22μm过滤器过滤，冷藏或冷冻备用。
2.2.3Westernblot
将细胞放入1.5mL离心管中，离心洗涤去除培养基，加入250μL裂解液，振荡15s放置20min后，强制旋转2min，离心10min取上清，测得其蛋白浓度后加入等量的SDS-PAGEloadingbuffer，煮5min、4℃冷却5min后进行蛋白电泳分离。Westernblot操作参照常规方法。
3.结果
3.1幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白的影响
Westernblot结果表明，加入不同浓度的幽门螺杆菌裂解液，均能够显著增加β-连环蛋白的表达（图1A）。同时，幽门螺杆菌裂解液的作用具有剂量依赖性，随着浓度的增加，β-连环蛋白的表达量也随之增加，说明β-连环蛋白的表达是与幽门螺杆菌裂解液浓度相关的（图1B）。
3.2幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白分子量的影响
Westernblot结果发现，幽门螺杆菌裂解液作用后β-连环蛋白的分子量发生了明显的变化。对比对照组，可以发现裂解液作用后β-连环蛋白的分子量增加了20kDa左右（图2A，B）。
图1幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白表达量的影响。
(A)Westernblot结果；(B)β-连环蛋白相对表达量与组别关系。
图2幽门螺杆菌裂解液对β-连环蛋白分子量的影响。
(A)Westernblot结果；(B)β-连环蛋白分子量与组别关系。
4.讨论
本文研究的结果表明，幽门螺杆菌裂解液能够促进β-连环蛋白的表达，并且能够改变其分子量。在幽门螺杆菌感染的过程中，它可以通过释放裂解液破坏细胞功能，特别是影响细胞黏附