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小鼠肝脏中丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰的蛋白质组学研究
摘要：
蛋白质乙酰化在调控生命过程中具有重要作用，肝脏在人体代谢中扮演着关键的角色。为了探究肝脏中丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰对蛋白质组的影响，我们进行了小鼠肝脏中乙酰化修饰的蛋白质组学研究。结果表明，丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰在肝脏的蛋白质中普遍存在，并且这些修饰对肝脏功能的调控具有重要作用，提示肝脏中蛋白质的乙酰化修饰可能与脂类代谢、葡萄糖代谢、氧化应激等多个生命过程密切相关。
关键词：丝氨酸乙酰化；苏氨酸乙酰化；赖氨酸乙酰化；肝脏；蛋白质组
引言：
蛋白质乙酰化是细胞内最常见的修饰机制之一，被广泛应用于调控蛋白质功能、转录调控、细胞增殖、端粒稳定性以及DNA损伤修复等重要生命过程，是细胞内多种信号转导通路的调节要素。蛋白质乙酰化通过酰化酶向靶蛋白添加乙酰基，从而影响靶蛋白的结构、活性、定位等生物化学性质，从而引起生理学上的变化。
肝脏是人体代谢的关键器官，肝脏功能障碍会引起人体内代谢过程的紊乱。肝脏中蛋白质乙酰化修饰的研究对于深入探究肝脏功能的调控机制，和找到新的治疗手段有着重要的意义。
本研究旨在探究小鼠肝脏中丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰对蛋白质组的影响，为深入探测肝脏生物学过程及相关疾病的发病机制和诊治提供新思路。
材料和方法：
1.取若干Balb/C小鼠，将小鼠肝脏取出。
2.将小鼠肝脏组织包含细胞膜、膜组分、细胞质、细胞核和线粒体在内的所有部分连同标准品混合吸附于羧甲基纤维素滤膜上，使用Tris-HClpH7.4缓冲液进行清洗，将含有粘附的蛋白质样品剪碎，将其键合至6%聚丙烯酰胺凝胶中。
3.电泳分离：将聚丙烯酰胺凝胶在清洁的电泳槽中，并充盈电泳缓冲液(0.025mol/LTris，0.19mol/LGly，0.02%SDS)，将细胞裂解液中蛋白质待电泳凝胶上，然后施加电压(60)V/1h，然后将电压提高到120V/1h，确保完全分离。分离出来的蛋白质块可预处理化学反应。
4.免疫共沉淀：将肝脏细胞裂解物补体后进行免疫共沉淀，将含有特定蛋白质的结合颗粒沉淀下来。
5.乙酰化修饰蛋白质的质谱分析：利用高分辨Tandem质谱仪设备，处理得到相关质谱数据，基于质谱数据，我们可以分析肝脏乙酰化修饰蛋白质的类型、位置、丰度等信息。
6.生物信息学分析：将发掘出来的蛋白群分析定位到MDA5、IRF3、TNF-α等与HIV感染相关的信号通路，进一步分析这些信号通路和肝脏乙酰的修饰，评估乙酰化修饰对身体内其他生物小分子和元素的影响，标注对肝脏的潜在作用。
结果：
我们对小鼠肝脏中丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰的蛋白质进行了组学研究。高效液相色谱质谱技术表明，小鼠肝脏中包含乙酰化修饰蛋白质的复杂性质谱图景象，乙酰化修饰的丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸很广泛地分布在各种细胞质和细胞器内，涉及多种调控通路和功能，包括脂类代谢、葡萄糖代谢、氧化应激等多个生命过程。生物信息学分析显示，这些乙酰化修饰与多个调控通路、信号转导通路、分子通道、环境因素等密切相关，可能参与原发性肝癌、脂肪肝等多个肝脏疾病的发生发展过程。
讨论：
本研究表明，在小鼠肝脏中，丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰广泛存在，并参与肝脏的多种调控通路和生命过程。这些修饰可能是物种特异性的，而且可能由环境因素和致病因素等决定。我们的结果为深入探究肝脏生物学过程及相关疾病的发病机制和诊治提供了新思路。
结论：
综上所述，我们使用高效液相色谱质谱技术和生物信息学分析技术，对小鼠肝脏中丝氨酸、苏氨酸和赖氨酸乙酰化修饰的蛋白质组学进行了深入探究。结果表明，这些修饰在肝脏的蛋白质中普遍存在，并且这些修饰对肝脏功能的调控具有重要作用，提示肝脏中蛋白质的乙酰化修饰可能与脂类代谢、葡萄糖代谢、氧化应激等多个生命过程密切相关。这些研究结果为进一步探究肝脏生物学过程及相关疾病的发病机制和治疗提供了新的思路。