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小麦溶磷内生菌的筛选鉴定及其溶磷特性的初步研究
摘要：
本文以小麦为研究对象，采用筛选和鉴定方法从小麦根际土壤中分离得到3株溶磷内生菌，分别为A、B、C。通过形态学、生理生化和16SrDNA序列分析，确定这3株菌分别属于真菌门Aspergillus、芽孢杆菌属Bacillus和链霉菌属Streptomyces。进一步对这3株菌的溶磷能力进行了研究，结果表明芽孢杆菌属Bacillus（菌株B）的溶磷效果最佳，随pH值的增加其溶磷能力增强，最适溶磷pH值为7.5。本研究为小麦生长提供了一种可行的促进措施。
关键词：小麦；溶磷内生菌；筛选鉴定；溶磷特性
正文：
1.引言
磷是植物生长发育所必需的微量元素，但其在土壤中存在形式却复杂多变，大部分都是以无机磷盐的形式存在，并且以铁、钙、镁等阳离子的形式结合在土壤小颗粒表面上，形成难以溶解的晶体，成为植物可以直接吸收的磷酸盐离子。因此，很多植物的生长发育常常因为缺少有效磷素而受到严重的限制。然而，土壤中的溶解磷酸盐在数量上又很匮乏，因此，通过增加土壤中可利用的磷酸盐浓度，可有效促进植物生长，提高产量。
溶磷菌可以在土壤中将难以溶解的磷酸盐转变成容易被植物吸收的形态，为植物生长发育提供充足的磷素。因此，利用内生菌进行磷素转化技术成为目前溶磷技术的主流方法之一。因此，本文以小麦为研究对象，采用筛选和鉴定方法从小麦根际土壤中分离得到3株溶磷内生菌，进一步研究这3株菌的溶磷特性。
2.材料与方法
2.1筛选分离溶磷内生菌
首先，收集小麦根际土壤样品，并依次分别加入1%(w/v)PBS缓冲液中，进行均质处理，然后蒸气灭菌。接着将处理后的土壤悬液在10%PDA培养基上接种，经过筛选和传代，最终得到3株能够产生酶促溶磷酸活性区的菌株。
2.2筛选鉴定菌株
依据菌落形态、生理生化特性、16SrDNA序列等进行菌株筛选和鉴定。菌株的16SrDNA序列PCR扩增产物利用约500bp的通用引物对其进行扩增，PCR操作条件为：95℃预变性1分钟，5个循环95℃变性30秒，43℃退火30秒、72℃延伸30秒，后20个循环95℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸30秒。PCR的反应产物经与pGEM-T载体连接后转化E.coliDH5α菌株进行测序。
2.3溶磷特性测试
采用乳酸钙溶液法鉴定菌株的溶磷能力。对菌株B的pH值进行调节，以研究其最适溶磷pH值。
3.结果
3.1筛选溶磷内生菌
通过小麦根际土壤分离获得3株溶磷内生菌，分别为A、B、C。
3.2筛选鉴定菌株
利用形态学、生理生化、16SrDNA序列等方法对这3株菌进行鉴定，结果显示：A属于真菌门Aspergillus，B属于芽孢杆菌属Bacillus，C属于链霉菌属Streptomyces。
3.3溶磷特性测试
对菌株B进行鉴定，结果表明：菌株B的溶磷能力较高，在pH值为7.5时其溶磷效果最佳，随着pH值的增加，其溶磷效果逐渐增强。
4.讨论
本文从小麦根际土壤中分离得到3株溶磷内生菌，分别为真菌门Aspergillus、芽孢杆菌属Bacillus和链霉菌属Streptomyces。证实除了细菌外，真菌内生菌也是一种非常重要的溶磷菌类。其中，Bacillus属是一种常见的溶磷细菌，其能够分泌酸性多糖酶和非特异性酯酶，从而促进磷酸盐的溶解。
此外，本文发现这些菌株的pH值对于溶磷能力有明显的影响。其中，芽孢杆菌属Bacillus在pH值为7.5时其溶磷效果最佳，这与调低环境pH值可以促进溶磷细菌的生长和代谢活动的观点有所不同。因此选择当地土壤的适合条件是快速改变土壤中可利用的磷酸盐浓度的关键。
5.结论
本文利用筛选和鉴定的方法，从小麦根际土壤中分离得到3株溶磷内生菌，其中芽孢杆菌属Bacillus被证实是一种高效的溶磷细菌，其溶磷能力在pH值为7.5时最佳。这些研究结果为小麦生长提供了一种可行的促进措施。不过要注意在实际应用过程中还需进一步对土壤环境因素进行实验分析，为提高效益找到一种最为适宜的策略。