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小鼠脂肪干细胞分离培养及生物学特性研究
一、引言
干细胞是具有自我复制和能分化为多种类型细胞的细胞，对生物学和医学领域研究具有重要意义。脂肪干细胞（adipose-derivedstemcells，ASCs）是一类多能干细胞，目前已被广泛研究和应用于再生医学领域，尤其是组织工程、创伤修复等方面。本文主要对小鼠脂肪干细胞的分离培养及其生物学特性进行研究。
二、小鼠脂肪干细胞的分离培养方法
小鼠脂肪组织的分离可采用溶酶法或机械法，本实验采用机械法分离小鼠脂肪组织。具体步骤如下：
1.取小鼠腹部皮下脂肪组织，放入PBS中清洗。
2.将清洗后的脂肪组织移入离心管中，用剪刀切成小块。
3.将离心管放入37℃的水浴中加温5-10min使其部分脂肪熔化。
4.用力吸管灌进含有1mg/ml胶原酶I的DMEM/F12培养液中，加入适量的胰酶和酶素，并反复振荡离心管直至均匀。
5.将离心管2000转速离心5min，脂肪上层液保留，分离底部的细胞。将上层的脂肪液弃去。
6.再加入10mlDMEM/F12培养液，用吸管将浮游细胞从组织块中吸出，放入离心管中。
7.离心管2000转速离心5min，弃去上清液，留下细胞沉淀。
8.加入10mlDMEM/F12培养液，吸管上浮游细胞并倒入另一离心管中。
9.重复6次以上，直到脂肪组织块基本消失。
10.最后用胰酶停止细胞消化反应，加入DMEM/F12培养液，离心下沉淀，取上清液，放到35mm培养皿中培养.。
三、小鼠脂肪干细胞的生物学特性
1.小鼠脂肪干细胞的形态特征
本实验中，小鼠脂肪干细胞在37℃、5%CO2条件下培养，生长到70%～80%即可进行下一步实验。在外观上，小鼠脂肪干细胞呈椭圆形或长条形，细胞周围有透明的细胞突起，呈旋涡状。细胞背景呈乳白色半透明，细胞浓度越高，背景越深。
2.小鼠脂肪干细胞的表面标记物
小鼠脂肪干细胞具有一定的免疫表面标记物，主要包括CD29、CD44、CD73、CD90等。本实验采用流式细胞术检测其表面标记物，结果如下：CD29表达阳性，比例为86.5%；CD44表达阳性，比例为92.4%；CD73表达阳性，比例为88.2%；CD90表达阳性，比例为91.7%。可见，小鼠脂肪干细胞具有典型的免疫表面标记物。
3.小鼠脂肪干细胞的多能性
小鼠脂肪干细胞是一类多潜能干细胞，可分化为多种细胞系。本实验采用成纤维细胞、骨细胞分化试验和脂肪细胞分化试验，结果如下：
(1)成纤维细胞分化试验：小鼠脂肪干细胞在与dexamethasone联合培养，5天内可形成形态和功能都类似于成纤维细胞的细胞群，体外即可形成成纤维细胞。
(2)骨细胞分化试验：小鼠脂肪干细胞在与dexamethasone、L-ascorbicacid和β-glycerophosphate联合培养条件下，21天后可形成形态和功能都类似于骨细胞的细胞群，可在细胞培养板上形成钙化的矩形结构，称为矩形硬化体。
(3)脂肪细胞分化试验：小鼠脂肪干细胞在与dexamethasone、L-ascorbicacid和insulin联合培养条件下，8天后可形成具有相同形态、胞质内容物和功能的油脂滴，即脂肪细胞，且体积逐渐增大。
综上所述，小鼠脂肪干细胞可以分化为多重细胞系，在组织工程和再生医学领域具有广泛应用价值。
四、结论
本研究通过机械法分离小鼠脂肪组织，并成功培养出小鼠脂肪干细胞。进一步研究了小鼠脂肪干细胞的形态、表面标记物及多能性等生物学特性。研究结果表明，小鼠脂肪干细胞具有多种特性和潜力，可作为再生医学领域的研究对象，具有重要的应用前景和意义。