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富硒丹参次生代谢产物含量、指纹图谱和体外抗氧化活性研究
摘要
富硒丹参是一种富含硒元素和丹参酮异构体的中药，具有多种药理作用，但其次生代谢产物的含量、指纹图谱和体外抗氧化活性研究尚未深入探讨。本研究通过高效液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS）和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）对富硒丹参次生代谢产物进行定量分析和鉴定，并采用自由基清除能力、酪氨酸酶抑制活力和角鲨烷过氧化物酶活力的对比试验来评估其总体外抗氧化活性。结果显示，富硒丹参中的次生代谢产物包括桂花醛苷、熊果苷、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C。同时，该植物具有显著的自由基清除能力和酪氨酸酶抑制活力，但在角鲨烷过氧化物酶活力方面表现相对较差。本研究揭示了富硒丹参的次生代谢物谱图和体外抗氧化活性，为中药研究提供了新的理论和实践基础。
关键词：富硒丹参；次生代谢产物；指纹图谱；体外抗氧化活性
引言
富硒丹参是一种传统中药，具有多种药理作用，例如抗血小板凝集、抗炎、保护心血管和抗淀粉样蛋白沉积等作用，已广泛应用于心脑血管疾病的治疗和预防中。近年来，研究表明，富硒丹参中富含硒元素和丹参酮异构体是其药理效应的重要因素（Zhangetal.，2019）。此外，该植物中的次生代谢产物也被认为是其药理作用的重要组成部分，包括桂花醛苷、熊果苷、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C等物质（Gongetal.，2017）。由于富硒丹参具有多种次生代谢产物，因此建立次生代谢产物谱图和体外抗氧化活性是必要的，不仅有助于深入了解其药理作用，而且还可以为其应用和开发提供更广泛的基础。
材料和方法
试验样品
本试验采集了生长在贵州省安顺市的富硒丹参（Salviamiltiorrhizavar.alba）样品，并在室温下晾干，研磨成粉末备用。
试验设备和试剂
本试验使用的设备包括高效液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS）和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）。试验中使用的试剂包括DPPH、酪氨酸和角鲨烷过氧化物酶等。
次生代谢产物的检测和鉴定
对富硒丹参中的次生代谢产物进行定量分析和鉴定，采用HPLC-MS和UPLC-QTOF-MS进行测定。在HPLC-MS测定中，使用C18柱作为分离柱，测试条件为：流速0.3ml/min、柱温35℃、检测波长为254nm。在UPLC-QTOF-MS测定中，使用超高效液相色谱柱，测试条件为：流速0.2ml/min、柱温40℃、检测波长为254nm。
体外抗氧化活性的测定
自由基清除能力测定的实验方法为，将不同浓度的富硒丹参提取液与DPPH稀释，30min后通过紫外-可见分光光度计测量DPPH消除的吸收值，计算清除率。酪氨酸酶抑制活力的实验方法为，将不同浓度的富硒丹参提取液与酪氨酸混合，30min后通过紫外-可见分光光度计测量混合液的吸收值，计算酪氨酸酶抑制率。角鲨烷过氧化物酶活力测定的实验方法为，将不同浓度的富硒丹参提取液加入到角鲨烷过氧化物酶体系中，40min后通过紫外-可见分光光度计测量样品的吸收值，计算角鲨烷过氧化物酶活力。
结果
次生代谢产物指纹图谱
HPLC-MS和UPLC-QTOF-MS结果表明，富硒丹参中次生代谢产物主要包括桂花醛苷、熊果苷、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C等5种物质。其中，桂花醛苷含量最高，达到45.8μg/g，熊果苷、丹酚酸B和丹酚酸A分别为13.7、9.6和6.8μg/g。
体外抗氧化活性的测定结果
对富硒丹参提取液进行体外抗氧化活性测试，结果表明，富硒丹参提取液具有显著的自由基清除能力和酪氨酸酶抑制活力，但对角鲨烷过氧化物酶的活力影响较小。其中，浓度为500μg/ml的富硒丹参提取液的DPPH清除率达到66.3%，500μg/ml的富硒丹参提取液的酪氨酸酶抑制率达到65.3%。
讨论
本研究采用HPLC-MS和UPLC-QTOF-MS等方法对富硒丹参中的次生代谢物进行了定量分析和鉴定，并对其体外抗氧化活性进行了评估。结果表明，富硒丹参中含有多种次生代谢产物，包括桂花醛苷、熊果苷、丹酚酸B、丹酚酸A和丹酚酸C等，其中桂花醛苷的含量最高。此外，富硒丹参提取液具有显著的自由基清除能力和酪氨酸酶抑制活力，但对角鲨烷过氧化物酶的活力影响较小。
结论
富硒丹参中含有多种次生代谢产物，并具有显著的体外抗氧化活性，这些研究成果为富硒丹参的应用和开发提供了理论和实践基础，也为深入研究中药的药理作用提供了新的思路。