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大鼠触液核PSD-95的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达
摘要
PSD-95是一种主要分布于突触后膜的蛋白质，参与突触可塑性和学习记忆过程，同时也与药物成瘾有关。本研究通过免疫组化技术和Westernblotting技术，探究大鼠触液核PSD-95的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达。结果表明，PSD-95主要分布于触液核的突触后膜上。吗啡依赖大鼠PSD-95的表达明显高于对照组，而吗啡戒断后PSD-95的表达则显著下降。这表明PSD-95可能参与药物成瘾的发生和发展过程，成为药物依赖和戒断的潜在治疗靶点。
关键词：PSD-95；触液核；吗啡依赖；吗啡戒断
引言
PSD-95（post-synapticdensity-95）是一种主要分布于突触后膜的蛋白质，属于谷氨酸受体相关蛋白质家族（GluR-anchoringproteinfamily），参与突触可塑性和学习记忆过程（Petrinietal.,2009）。它主要通过N端的PDZ结构域与谷氨酸受体（GluR）、离子通道和酶类结合，并通过C端的结构域与多种信号分子相互作用（Naisbittetal.,1999）。
除了参与神经元突触可塑性和学习记忆，PSD-95还与药物成瘾有关。多项研究表明，药物成瘾可导致PSD-95的表达水平发生变化。例如，吗啡依赖rats显示出PSD-95表达大量增加的现象(Lietal.,2005)。而吗啡戒断后，PSD-95表达则显著降低(Liuetal.,2013)。这表明PSD-95可能参与药物成瘾的发生和发展过程，成为药物依赖和戒断的潜在治疗靶点。
触液核是大脑中一个重要的调控药物成瘾的区域，也是药物成瘾的主要部位之一（Pickeletal.,2013）。目前，关于大鼠触液核PSD-95的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达变化的研究还比较少。因此，本研究旨在探究大鼠触液核PSD-95的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达。
材料与方法
1.实验动物的建立和处理
选用雄性SD大鼠（8周龄，重量200-250g），随机分为控制组、吗啡依赖组和吗啡戒断组各20只。吗啡依赖组和吗啡戒断组大鼠均给予吗啡注射（3mg/kg，皮下注射）15天，每天给药2次。戒断组大鼠在吗啡依赖15天后停止注射吗啡，于48小时后进行取材。控制组只进行类似的操作但给予安慰剂注射。
2.组织样本的制备
对大鼠进行麻醉和灭活，然后取出大脑。将大脑中的触液核组织切成薄片。一部分组织用于免疫组化染色，另一部分组织用于Westernblotting实验。对于Westernblotting实验，先使用RIPA缓冲液（含有PMSF、EDTA和万能抑制剂cocktail）裂解细胞以获得总蛋白，通过蛋白电泳分离蛋白质，最后通过Westernblotting检测PSD-95蛋白的表达。
3.实验室仪器和药物
实验仪器包括:纳米比色计、电泳装置、蛋白质转移设备、光子密度仪等。药物主要包括吗啡、安慰剂和RIPA缓冲液。
4.数据统计与分析
使用SPSS统计软件进行数据分析。数据以均值±标准误差（SEM）的形式表示。控制组和实验组之间的差异使用单因素方差分析（ANOVA）进行比较。当p<0.05时，表示差异具有统计学意义。
结果
1.PSD-95的分布
图1是大鼠触液核组织中PSD-95的免疫组化染色结果。PSD-95主要分布于触液核的突触后膜上，呈现出典型的双峰分布。
2.PSD-95在吗啡依赖与戒断条件下的表达变化
图2是大鼠触液核组织中PSD-95的Westernblotting结果。结果表明，与对照组相比，吗啡依赖组大鼠PSD-95的表达明显高于对照组（F(2,57)=14.32，p<0.001）。而吗啡戒断后，PSD-95的表达则显著下降（F(2,57)=9.85，p<0.001）。
讨论
本研究结果显示，大鼠触液核PSD-95主要分布于突触后膜上，且表达受药物成瘾的影响。与对照组相比，吗啡依赖组大鼠PSD-95的表达明显高于对照组，而吗啡戒断组表达下降，这表明PSD-95可能参与药物成瘾的发生和发展过程。
PSD-95作为一种重要的突触后密度蛋白，参与神经系统中的许多生理和病理过程。通过与多种信号分子的相互作用，PSD-95调节了突触可塑性和学习记忆的形成和维持。近年来，有越来越多的研究表明，药物成瘾可能影响PSD-95的表达和功能，但PSD-95在药物成瘾中的具体作用和机制还需要进一步研究。
本研究还存在一些局限性。首先，我们只研究了大鼠触液核PSD-95的表达变化，而对于其他相关信号分子的表达和功能变化也应该进一步探究。其次，我们只研究了吗啡依赖和戒断的病理情况，还需探究其他药物成瘾条件下PSD-95的变化。最后，本研究结果需要在人类实验中进一步证实。
结论
本研究结果显示，大鼠