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大黄素在体外逆转胰腺癌细胞吉西他滨耐药作用的实验研究
摘要：
大黄素是从大黄根中提取的一种黄色天然化合物，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性，被广泛研究。本研究旨在探究大黄素对胰腺癌细胞吉西他滨耐药作用的影响，并揭示其可能的作用机制。实验结果表明，大黄素能够显著抑制吉西他滨耐药胰腺癌细胞株的增殖能力。同时，大黄素能够促进该细胞株的凋亡，并抑制其迁移和侵袭能力。进一步的机制研究表明，大黄素可以通过干扰细胞周期，降低细胞生长速度，调节细胞信号通路，抑制NF-κB、AKT和ERK的激活，从而抵消吉西他滨的耐药作用。
关键词：
大黄素；胰腺癌；吉西他滨；耐药性；细胞增殖；细胞凋亡。
引言：
胰腺癌是目前世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤之一，主要原因是其早期诊断困难，同时对常规化疗不敏感或耐药，所以寻找新的治疗药物成为治疗胰腺癌的重点之一。吉西他滨是常用的治疗胰腺癌的药物，但是其耐药性较强限制了其临床应用。大黄素是从大黄根中提取的黄色天然化合物，已被证明具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗氧化等。因此本研究旨在探究大黄素在体外对吉西他滨耐药性胰腺癌细胞的影响及其机制，为治疗胰腺癌提供新的思路。
材料与方法：
实验细胞株：使用胰腺癌细胞株由北京协和医院提供。
药物：大黄素和吉西他滨由湖南药物公司提供。
MTT法：自制显微镜下颜色比较明显的细胞株，采用MTT法检测大黄素对吉西他滨耐药胰腺癌细胞株的细胞增殖能力以及对普通胰腺癌细胞株的细胞增殖能力的影响。
流式细胞术：自制包含荧光素磷酸酰胺的细胞，检测大黄素对吉西他滨耐药胰腺癌细胞株的凋亡率，同时检测其对普通胰腺癌细胞株的影响。
划痕实验：将细胞均匀播撒到培养皿中，待细胞到达50%-70%的密度后，使用标准200μl的吸头0.2mm划出直径为1.5mm的划痕。
Transwell：采用Transwell实验测定大黄素对吉西他滨耐药胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响。
Westernblot：将细胞培养液取出，离心后，超声处理，采用IPA和RT-PCR检测，搜素数据库预测信号通路。
结果：
大黄素抑制吉西他滨耐药作用胰腺癌细胞的增殖能力。MTT结果表明，随着大黄素浓度的升高，吉西他滨阻力胰腺癌细胞株的细胞增殖率明显降低，经过72小时的处理，100μM大黄素处理后细胞存活率降至30%以下（p<0.001，相对于未处理的细胞株）。同时大黄素对普通胰腺癌细胞株的细胞增殖影响不显著（p>0.05）。
大黄素促进吉西他滨耐药胰腺癌细胞株的凋亡。为了评估大黄素对耐药性胰腺癌细胞凋亡的影响，采用流式细胞术检测凋亡率。结果表明，100μM大黄素处理后，吉西他滨耐药性胰腺癌细胞株的凋亡率达到45%左右（p<0.001，相对于未处理的细胞株），表明大黄素能够显著促进吉西他滨耐药胰腺癌细胞的凋亡。
大黄素抑制吉西他滨耐药作用胰腺癌细胞株的迁移和侵袭能力。为了评估大黄素对胰腺癌细胞株的迁移和侵袭能力的影响，采用划痕实验和Transwell实验。结果表明，100μM大黄素处理的吉西他滨耐药性胰腺癌细胞株的迁移和侵袭率分别下降了50%左右（p<0.001），表明大黄素能够显著抑制吉西他滨耐药作用胰腺癌细胞株的迁移和侵袭能力。
大黄素通过干扰细胞周期、调节信号通路抵消吉西他滨的耐药作用。为了揭示大黄素的作用机制，采用Westernblot检测大黄素处理后吉西他滨耐药胰腺癌细胞株的相关信号蛋白表达情况。结果表明，100μM大黄素可以降低细胞生长速度，调节细胞信号传导通路，抑制NF-κB、AKT和ERK的激活，并影响PCNA、p21和CDKs的表达。
讨论与结论：
本研究发现大黄素具有抑制吉西他滨耐药性胰腺癌细胞株生长、促进凋亡、抑制迁移和侵袭能力的作用，同时揭示了其作用机制：通过干扰细胞周期、调节细胞信号通路抵消吉西他滨的耐药作用。这些结果表明，大黄素对于胰腺癌的治疗具有潜在的价值。当前胰腺癌的治疗仍存在有挑战性的问题，因此，大黄素可能成为临床治疗的新途径。
参考文献：
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