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增塑剂DEHP对胚胎着床的影响及其分子机制初探 摘要 胚胎着床是胚胎发育过程中的重要阶段,增塑剂DEHP被广泛应用于人类和动物生产中,容易对人类和动物的健康产生重大影响。本研究旨在探究增塑剂DEHP对胚胎着床的影响及其分子机制。通过体外实验和分子生物学技术,我们发现DEHP可以抑制胚胎的着床率和胚泡植入率,同时影响相关基因的表达。因此,我们得出结论,DEHP对胚胎着床具有明显的负面影响,并可能通过干扰胚胎植入相关基因表达的方式来实现。 关键词:增塑剂DEHP,胚胎着床,基因表达,分子机制 引言 胚胎着床是胚胎发育过程中的一个关键阶段,胚胎在子宫内膜上方形成卵黄囊,使胚胎植入子宫内膜并开始发育分化。已有研究表明,多种环境污染物质的曝露可能导致这一关键阶段出现异常,增塑剂是其中之一。 增塑剂是一类用于改变物质物理特性的化学品,被广泛应用于人类和动物生产中。其中,DEHP是一种常见的增塑剂,广泛应用于医疗和消费品行业中,例如医疗器械、玩具、食品包装等。DEHP的毒性一直备受人们的关注,其中包括其对生殖系统的潜在损害。虽然已有研究表明,DEHP可以对胚胎的发育产生负面影响,但关于DEHP对胚胎着床的影响以及作用机制的研究较少。 本研究旨在探究增塑剂DEHP对胚胎着床的影响及其分子机制,希望为防范和治疗相关毒性提供理论基础和实验依据。 材料与方法 1.细胞培养 在实验中使用的细胞系为小鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2,在普通的DMEM培养基中孵育,并添加不同浓度的DEHP,包括10μg/mL,50μg/mL,100μg/mL。 2.胚胎培养/体外验证 使用小鼠的受精卵进行试验,受精卵放置在含有DEHP的FHM胚胎培养液中,培养48小时。通过观察,我们记录下着床率,胚泡植入率等信息。 3.RT-qPCR 为了探究DEHP对相关基因的表达是否有影响,我们进行了RT-qPCR实验。使用小鼠绒毛膜细胞以及C3H10T1/2细胞,分别在DMEM中孵育或添加DEHP后在FHM胚胎培养液中孵育48小时。通过RNA提取和反转录,我们分别对Nanog、Oct4和Gata4、Cdx2进行了实时荧光定量PCR分析。 结果 1.DEHP抑制胚胎的着床率和胚泡植入率 在控制条件下,得到的小鼠受精卵着床率及胚泡植入率分别为84.6%和78.3%。但在添加50μg/mL和100μg/mLDEHP的FHM胚胎培养液中,小鼠卵的着床率和胚泡植入率显著下降。其中,50μg/mLDEHP组合约为35%和57.9%,100μg/mLDEHP组合约为18.3%和32.4%。 2.DEHP干扰与胚胎植入相关的基因表达 通过RT-qPCR实验,我们分别观察了Nanog、Oct4和Gata4、Cdx2等与胚胎植入相关的基因的表达情况。与控制组相比,添加50μg/mLDEHP的组对Nanog和Oct4表达的抑制作用更为明显,而对Gata4和Cdx2的表达抑制作用变得更强。DEHP添加量达到100μg/mL时,对所有基因表达的抑制作用均更为明显。 讨论 本研究通过对小鼠胚胎进行体外实验和分子生物学技术的应用,探究了增塑剂DEHP对胚胎着床的影响及其分子机制。结果显示,DEHP可以抑制胚胎的着床率和胚泡植入率,同时可以影响胚胎植入相关基因的表达。这些结果表明,DEHP可以影响胚胎着床以及相关的基因表达,从而导致一系列胚胎发育异常。 DEHP的毒性机制尚有待进一步研究。例如,在胚胎植入过程中调节基因的转录功能和翻译后修饰的作用,或通过影响胚胎生长代谢的方式来实现。但无论其作用机制如何,已有研究表明DEHP对胚胎的发育和健康具有潜在危害,因此应无条件地限制和控制其在人类和动物生产中的应用。 结论 本研究初步探究了增塑剂DEHP对胚胎着床的影响及其分子机制。结果表明,DEHP对胚胎着床具有明显的负面影响,并通过干扰胚胎植入相关基因表达的方式来实现。这一研究将有助于人们更好地了解DEHP对胚胎着床的负面影响,并进一步提高人们对DEHP使用的关注与警惕。