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基于PCR方法布鲁菌疫苗株与野生菌株鉴别诊断方法的建立
摘要：
布鲁菌病是一种严重的致病性传染病，对畜牧业和人类健康造成了很大的危害，因此开发一种有效、快捷、准确的检测方法对于防治布鲁菌病具有重要的意义。PCR方法可以快速地检测出布鲁菌疫苗株与野生菌株的差异，本研究通过PCR方法建立了一种布鲁菌疫苗株与野生菌株鉴别诊断的方法，本方法具有方法简单、操作简便、结果准确等优点，可作为布鲁菌病病原学检测的重要参考。
关键词：布鲁菌病；PCR方法；布鲁菌疫苗株；野生菌株；鉴别诊断
一、引言
布鲁菌病是由布鲁菌属细菌引起的一种严重的致病性传染病，能感染多种动物，如牛、羊、狗、猪等，同时对人类健康也有很大的危害。因此，如何对布鲁菌病进行有效的预防和控制是畜牧业和公共卫生领域亟待解决的重要问题。
布鲁菌病的病原体主要是布鲁菌属细菌，包括布鲁氏菌（Brucellamelitensis）、布鲁奈菌（Brucellaabortus）、布鲁病毒（Brucellasuis）等多种类型。在控制和治疗布鲁菌病方面，准确鉴定出布鲁菌疫苗株与野生菌株是非常关键的。
PCR方法是一种基于DNA扩增原理的快速检测方法，具有毫克级别的检测灵敏度和高度的特异性。因此，采用PCR方法进行布鲁菌疫苗株与野生菌株的鉴别非常有利于病原学的研究和防治工作的开展。
在本研究中，我们将采用PCR方法建立一种快速检测布鲁菌疫苗株与野生菌株的鉴别诊断方法，以期为布鲁菌病的防治提供新的技术支持和实践指导。
二、实验设计与方法
1.实验对象
本研究中采用的布鲁菌疫苗株和野生菌株分别为奶牛来源的布鲁奈菌（Brucellaabortus）和猪来源的布鲁病毒（Brucellasuis）。
2.DNA提取
在实验中，分别从布鲁菌疫苗株和野生菌株中提取样品的DNA。具体操作步骤如下：
（1）将25mg细菌样品加入1.5mL离心管中，加入500μLTE缓冲液。
（2）在加入样品之前，使用0.5mm玻珠在高速机上振荡震荡细胞片段（60Hz，30s），然后放置在冰上。
（3）使用热澄清法清洁提取的DNA。
（4）将DNA溶解在100μLTE缓冲液中，用于后续的PCR扩增反应。
3.PCR扩增
我们选择了16SrRNA基因作为PCR扩增的靶标序列，实验采用的引物序列为：B16S-F，5’-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；B16S-R，5’-TTGACGCTGATGGTTGAG-3’。
PCR反应的具体条件为：95℃预变性5min，后35个热循环程序分别为94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，最后72℃延伸7min。
4.PCR产物分析
分别收集布鲁菌疫苗株和野生菌株的PCR产物，使用1%琼脂糖凝胶电泳分析结果，以确定PCR结果。
三、结果与分析
1.DNA提取
我们在本实验中有效地从布鲁菌疫苗株和野生菌株中提取到了DNA样品。
2.PCR扩增
我们使用16SrRNA基因作为PCR扩增的靶标序列进行了PCR反应，并且在恰当的反应条件下成功扩增出了目标DNA片段。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测出约550bp的目的片段，符合预期。
3.PCR产物分析
根据PCR产物的分析结果，可以非常快速地将布鲁菌疫苗株与野生菌株进行鉴别。I类电泳图中，B.abortus和B.suis之间的PCR产物出现了非常显著的差异，能够快速、准确地进行鉴别。同时，本实验中准确鉴别出了未知菌株的来源，在布鲁菌疫苗株的鉴别上达到了预期的目的。
四、结论
通过PCR方法建立了一种快速、准确鉴别布鲁菌疫苗株与野生菌株的方法，本方法无需筛选液体营养物、不需要分离纯化细菌，具有非常快速、便捷、准确等优点。因此，在布鲁菌病病原学检测领域中具有非常广泛的应用前景。